Pata Gram

Pata de Gram este un test de laborator care explică clasificarea bacteriilor ca Gram-pozitive și Gram-negative (denumite și Gram + și Gram- ). A fost dezvoltat în 1884 de medicul danezHans Joachim Christian Gram și evidențiază câteva proprietăți fundamentale ale peretelui celular al microorganismelor.

Cu această metodă este posibil să se examineze atât bacteriile cultivate, cât și fragmentele de țesut.

Pata Gram a unor microorganisme comune

Bacterii gram-negative

Același subiect în detaliu: bacterii gram-negative .

Peretele bacteriilor Gram-negative este foarte complex, membrana exterioară se află în afara stratului de peptidoglican , iar proteina prezentă în cea mai mare cantitate este lipoproteina Brown, care are o terminație hidrofobă prin care se leagă de membrana exterioară. În acest fel, lipoproteina acționează ca un liant între membrana exterioară și stratul de peptidoglican. Membrana exterioară are multe molecule mari și complexe, numite „lipopolizaharide (LPS)”, împărțite în trei complexe distincte:

• regiunea lipidei A : constând dintr-o dizaharidă cu trei acizi grași și fosfat atașați la fiecare carbohidrat, o parte din care se proiectează de la suprafață spre exterior, în timp ce restul complexului este ancorat de membrana exterioară.
• nucleul (sau nucleul ) polizaharidic : alcătuit dintr-un lanț de 10 zaharuri, este legat de lipida A. Conține, în general, zaharuri și fosfați încărcați electric, de aceea ajută la transformarea negativă a suprafeței bacteriene.
• lanțul lateral O sau antigenul O : format dintr-un lanț scurt de polizaharide care se proiectează de la nucleu spre exterior; compoziția sa variază în funcție de tulpina bacteriană.

Anticorpii celulelor gazdă sunt capabili să recunoască lanțurile laterale O, dar bacteriile Gram negative sunt capabile să modifice natura lanțurilor laterale pentru a contracara apărarea gazdei.

Acest tip de bacterii este mai rezistent la antibiotice , deoarece enzimele , cum ar fi beta-lactamaza , sunt prezente în periplasmă, care distrug inelul beta-lactamic al unor antibiotice, inclusiv penicilina .

Metodă

1. Puneți o picătură de apă pe lamela microscopului .

Colonia de Bacillus cereus (Gram +)

2. Sterilizați bucla și luați cu ea microorganismul dintr-o placă.

3. Răspândiți organismul din colonie pe picătură.

4. Așteptați să se usuce.

5. Fixați glisiera trecând-o peste bunsen, astfel încât să adere bine.

6. Pregătiți o tavă de colorare și așezați lamele pe un suport orizontal sau păstrați lamela orizontală cu ajutorul unui suport pentru lamele.

7. Acoperiți preparatul cu violet de gentiană sau violet de cristal care colorează componentele acide ale peretelui bacterian și lăsați să acționeze timp de două minute.

8. Eliminați excesul de colorant și clătiți cu apă;

Colonia Escherichia coli (Gram -)

9. Acoperiți cu lichidul Lugol care acționează ca un mordant . Lasă un minut. Glisați excesul de Lugol și decolorați lamela cu etanol . În acest moment, partea externă a Gram-, constând dintr-un strat dublu de lipide și lipopolizaharide și legată de colorant, va fi solvatată de etanol, lăsând stratul de peptidoglican subiacent. Peretele Gram +, pe de altă parte, format dintr-un strat gros de peptidoglican, nu va fi solvatat și va rămâne legat de cristalul violet.

10. Se combate cu safranin timp de un minut. Safranina colorează componentele acide lăsate libere de Gram-le colorează în roșu, în timp ce nu se poate lega de componentele moleculare ale Gram +, angajate în legarea cu cristalul-violet. Clătiți cu apă, scurgeți diapozitivul și lăsați-l să se usuce în aer sau trecându-l peste arzătorul cu bunsen.

11. Observați la microscopul luminos mai întâi la mărire redusă și apoi cu un obiectiv de imersiune . Ca rezultat final, bacteriile Gram + vor avea culoarea violet, în timp ce bacteriile Gram vor fi roșii .

Culturile bacteriene foarte vechi tind să rețină mai puțin din colorant, parând mai puțin Gram-pozitive decât sunt de fapt; unele (puține) specii de bacterii, de asemenea, nu dau un răspuns clar la colorare și sunt numite variabile Gram .

Colorarea Gram este o colorare regresivă deoarece, după o primă colorare generală cu cristal violet sau gentiană, bacteriile Gram vor fi decolorate cu alcool etilic pur și apoi recolorate folosind safranină.

Semnificația biologică a colorării

Diferența în capacitatea de a reține colorantul bazic este dată de cantitatea de peptidoglican ( mureină ) conținută în peretele celular: Gram-pozitivii au aminoacizi N-acetilglucozamină și acid N-acetilmuramic , de care sunt legate lanțuri scurte de aminoacizi. , care conferă stabilitate și consistență acestui strat; cele Gram-negative au în schimb un perete mai subțire, bogat în lipopolizaharide și lipoproteine.

Elemente conexe

• Agar MacConkey

Alte proiecte

• Wikimedia Commons conține imagini sau alte fișiere despre colorarea Gram

linkuri externe

• Pata Gram , pe pacifici-net.it . Adus la 31 octombrie 2007 (arhivat din original la 16 iulie 2007) .
• O animație a metodei Gram ( SWF ), pe student.ccbcmd.edu . Adus la 18 noiembrie 2009 (arhivat din original la 27 iulie 2010) .
• ( RO ) IUPAC Gold Book, „Gram pata” , pe goldbook.iupac.org .

Portalul de microbiologie : Accesați intrările Wikipedia care se ocupă de microbiologie