Hematoxilină
Hematoxilina (cunoscută și sub numărul CI 75290) este o substanță cu formula empirică C 16 H 14 O 6 care este extrasă din planta Haematoxylum campechianum , o plantă originară din statul mexican Campeche, mai cunoscută sub numele de camping. Mulți cred că hematoxilina este un colorant bazic și, prin urmare, tinde să se lege de moleculele de acid (deci bazofile). De fapt, hematoxilina ca atare nu este un colorant. Substanța devine astfel atunci când se oxidează transformându-se în hematină [1] . Cu toate acestea, hematina are o afinitate mică pentru țesuturi. Pentru a putea colora trebuie să se combine cu substanțe, în special cu niște ioni metalici (mordanți), cele mai importante sunt sărurile de fier, aluminiu, tungsten și plumb. Complexele metal-hematină sunt utilizate pentru colorarea nucleelor celulare înainte de examinarea microscopică. Există diferite preparate de soluții de hematoxilină care trebuie utilizate pe baza sării utilizate pentru oxidarea acesteia, unele mai potrivite în special în raport cu scopul specific de utilizare.
Colorarea hematoxilinei și eozinei este una dintre cele mai frecvent utilizate pete în histologie. Este mai degrabă o culoare permanentă decât o culoare temporară (de exemplu, soluție de iod în KI).
O altă colorare obișnuită, utilizată în principal pentru evidențierea structurilor care conțin substanțe mucoase, este pata de hematoxilină fosfotungstică, un amestec de hematoxilină cu acid fosfotungstic [2] .
Pete cu hematoxilină
Aceste pete sunt utilizate în mod obișnuit pentru studii histologice. Mordanții utilizați pentru evidențierea structurilor nucleare și citoplasmatice sunt aluminiu și fier, care formează complexe colorate (complexe colorant-pete-țesut), de culoare variabilă în funcție de sarea utilizată. Prezența sărurilor de aluminiu provoacă o culoare albastru-alb, în timp ce prezența sărurilor de fier provoacă o culoare albastru-negru.
Petele de hematoxilină și aluminiu
Cele trei soluții majore de hematoxilină care utilizează ionii de aluminiu ca mordant sunt hematoxilina Ehrlich, hematoxilina Harris și hematoxilina Mayer. Denumirea de hemaluminiu ar fi preferabilă celei de „hematoxilină” pentru aceste soluții, deoarece hematoxilina, produsul de oxidare al hematoxilinei, este compusul care se combină cu ionii de aluminiu pentru a forma complexul activ colorant-metal. Soluțiile de hematoxilină din aluminiu determină pătarea roșie a nucleelor celulare, care se schimbă rapid în albastru după expunerea la orice lichid neutru sau alcalin. Alunul de potasiu (sau sulfatul de potasiu dublu de aluminiu dodecahidrat) utilizat ca mordant se disociază de obicei într-o soluție alcalină, care se combină cu OH- a apei pentru a forma hidroxid de aluminiu insolubil. În prezența excesului de acid, hidroxidul de aluminiu nu se poate forma. Acest fapt determină eșecul colorării, din cauza lipsei substanțiale de ioni OH. Prin urmare, soluțiile acide de hematoxilină și aluminiu devin roșii. În timpul colorării, secțiunile colorate cu hematoxilină-aluminiu sunt de obicei trecute sub o soluție neutră sau alcalină (de exemplu, spălări prelungite cu apă de la robinet sau clătiri alcaline puternice cu hidroxid de amoniu 1%) pentru a neutraliza acidul și a forma un complex de hematină din aluminiu insolubil albastru. Această procedură este cunoscută sub numele de albastru.
Când apa de la robinet nu este suficient de alcalin, sau chiar acide și , prin urmare , nesatisfăcătoare pentru procedura albăstrelii, un substitut, numita soluție tampon Scott, constând din 3,5 g de bicarbonat de sodiu (NaHCC 3) poate fi utilizat și 20 g de sulfat de magneziu (MgSO 4 ) într - un litru de apă (H2O) cu timol, pentru a inhiba formarea de mucegai. Utilizarea apei foarte reci încetinește procesul de albire, dimpotrivă, creșterea temperaturii o accelerează. Din acest motiv, trebuie amintit că utilizarea apei la o temperatură sub 10 ° C poate provoca, de asemenea, artefacte roz în țesutul analizat.
Costurile colorării
În anii 1970, pe piață a fost creată o lipsă severă de lemn de camping și, prin urmare, de hematoxilină. Prețul vopselei a crescut și acest fapt a avut repercusiuni grave asupra costurilor diagnosticului histopatologic. A existat un impuls major în căutarea coloranților nucleari alternativi. Înainte ca utilizarea coloranților alternativi să se consolideze, hematoxilina a revenit pe piață la prețuri mai rezonabile, deși mai mari decât cele originale și și-a reluat locul în histopatologie. Tensiunile asupra prețurilor hematoxilinei rămân și astăzi [3] .
Culori alternative
Au fost recomandați un număr de coloranți ca posibili înlocuitori: albastru de celestină (CI 51050), galocianină (CI 51030), galleină (CI 45445) și Eriochromocyanin R (CI 43820) [4] . Toți folosesc ioni de fier ca mordant. O altă alternativă este colorantul roșu natural 24, care diferă de hematoxilină printr-o singură grupare hidroxil.
Notă
- ^ Young B, Lowe JS, Stevens A, Heath JW. Wheater. Histologie și anatomie microscopică. Elsevier Masson. (2006)
- ^ Mazzi V. Tehnici histologice și histochimice. Piccin Publisher. (1977)
- ^ Dapson R, Horobin RW, Kiernan J. Lipsa hematoxilinei: cauzele și durata lor și alți coloranți care pot înlocui hemalumul în colorarea de rutină a hematoxilinei și a eozinei. Biochimie histochimică. 2010 februarie; 85 (1): 55-63. PMID 19562570
- ^ Villavecchia V, Eigenmann G. New Dictionary of Commodityology and Applied Chemistry, Volumul 3. Hoepli Editore. (1995). ISBN 88-203-0530-5
Alte proiecte
-
Wikimedia Commons conține imagini sau alte fișiere despre hematoxilină
