Zimogramă
Zimograma este o tehnică electroforetică , bazată pe electroforeza SDS-PAGE, care include un substrat copolimerizat într-un gel de poliacrilamidă pentru detectarea activității enzimatice . Probele sunt preparate într-un SDS-PAGE standard , dar nu sunt fierte (inactivate) și nu se utilizează agenți reducători. După electroforeză SDS este îndepărtat din gel (sau zimogramă) prin spălare cu Triton X -100, după spălare zimograma este incubată într-un tampon de digestie adecvat la temperatura optimă de aproximativ 37 ° C. Zimograma este colorată ulterior (de obicei cu amidon negru sau albastru Coomassie), zonele în care a avut loc digestia vor apărea ușoare, în timp ce zonele în care digestia nu a avut loc vor apărea întunecate. Este posibil să se dezvolte o zimogramă sau o anti-zimogramă , diferența dintre cele două metode vizează detectarea fie a activității unei enzime specifice, fie a unui inhibitor al unei enzime specifice. În zimogramă, gelul poliacrilamidic polimerizat care conține substratul de digestie în care are loc cursul electroforetic al enzimei (inhibat temporar de SDS) după separarea proteinelor (curentul electroforetic) este spălat pentru a îndepărta agentul de inactivare și reacția (digestie ) apare prin scufundarea gelului într-un tampon de optimizare ale cărui benzi luminoase vor indica activitatea enzimei pe o frunză complet colorată (vopseaua se leagă de substratul enzimei). Anti-zimograma urmează o cale ușor diferită, gelul conține întotdeauna substratul, dar din moment ce căutăm inhibitorii unei enzime (plasate în gelul de electroforeză) nu folosim SDS, ci în tamponul de reacție optimizant enzima de se adaugă interes, astfel încât enzima va digera tot substratul, cu excepția punctelor în care se găsesc inhibitorii acestuia. Revelația ulterioară va da zone întunecate în care inhibitorii au funcționat pe un fundal deschis.