Imunofluorescența
Imunofluorescența este una dintre cele mai utilizate tehnici printre reacțiile serologice , de importanță fundamentală în microbiologie , imunologie sau, în orice caz, în laboratorul biomedical, pentru a detecta într-un anumit eșantion prezența unor antigeni specifici sau anticorpi necunoscuți al căror omolog cunoscut (cel disponibil) al cercetătorului sau tehnicianului de laborator) este legat în mod diferit de un marker. Markerul este un fluorocrom, adică un colorant care prin absorbția undelor de înaltă frecvență ( ultraviolete ) emite în vizibil. Cel mai utilizat fluorocrom este izotiocianatul de fluoresceină (sau pur și simplu fluoresceina ) care, prin absorbția razelor ultraviolete, prin urmare, cu ajutorul unui microscop luminat de o sursă adecvată, emite lumină verde. Există două metode principale care utilizează principiul imunofluorescenței, cea directă și cea indirectă.
Imunofluorescență directă (IFD)
Atunci când se caută un antigen corpuscular necunoscut ( bacterie , celulă , ...), antigenul trebuie fixat pe lamă (sau fântână) cu metode speciale, apoi presupușii anticorpi specifici marcați cu fluoresceină sunt puse în contact. Se lasă în contact pentru timpul necesar interacțiunii antigen-anticorp, astfel se vor elimina anticorpii fluorescenți nelegați. Dacă corpusculii fluorescenți (verde strălucitor) apar la microscop, pe un fundal întunecat, incolor, înseamnă că antiserul (serul care conține anticorpi fluorescenți) este specific pentru acel antigen. Veți avea apoi un rezultat pozitiv.
Cu toate acestea, această tehnică nu permite căutarea anticorpilor specifici într-un ser preluat de la un subiect. În schimb, imunofluorescența indirectă ajută.
Imunofluorescență indirectă (IFI)
Imunofluorescența indirectă poate fi utilizată pentru a căuta un antigen sau anticorp necunoscut.
În căutarea anticorpului necunoscut (Ab?), Serul testat trebuie pus în contact cu antigenii cunoscuți (Ag) atașați la o lamă. Se va forma eventualul complex imunitar primar. Apoi trebuie adăugat un antiser imunoglobulină, din specia din care provine serul examinat, etichetat cu fluoresceină (AbIg II *), dacă anticorpii rămân în preparat după prima spălare, se va forma un imunocomplex secundar. Dacă se observă o fluorescență la observarea preparatului ultraviolet, înseamnă că anticorpul căutat este specific antigenului cunoscut de noi.
Avantajele tehnicii indirecte sunt diverse. În primul rând, necesitatea de a utiliza un singur tip de anticorpi etichetați cu fluoresceina, adică anti-imunoglobuline, care sunt produse industrial și achiziționate de laboratoare. Cercetarea directă, dacă ar fi aplicată întotdeauna, ar prevedea că fiecare laborator se va echipa cu sute de antiseruri fluorescente specifice, rezultând un cost disproporționat. Un alt avantaj este faptul că la fiecare anticorp primar „gol”, legat de antigenul fix, anticorpii secundari mai marcați se leagă (la porțiunile constante Fc de Ab I), rezultând astfel o amplificare a luminozității.
Alte proiecte
-
Wikimedia Commons conține imagini sau alte fișiere despre imunofluorescență
linkuri externe
- Imagini ale bolilor autoimune de la Universitatea din Birmingham
- Protocoale de imunofluorescență și microscopie confocală , la confocal-microscopy.org .
- bio.davidson.edu , https://web.archive.org/web/20161228112201/http://www.bio.davidson.edu/Courses/genomics/method/IMF.html . Adus la 10 februarie 2008 (arhivat din original la 28 decembrie 2016) .
- prosci-inc.com , http://www.prosci-inc.com/Immunofluorescence-Protocol.html .
| Controlul autorității | Tezaur BNCF 46155 · LCCN (EN) sh85064559 · BNF (FR) cb11983563h (data) |
|---|
