Polilinker

Această intrare pe tema geneticii este doar o schiță . Contribuiți la îmbunătățirea acestuia în conformitate cu convențiile Wikipedia . Urmați sfaturile de proiectare de referință .

Această intrare sau secțiune despre genetică nu citează sursele necesare sau cei prezenți sunt insuficienți . Puteți îmbunătăți această intrare adăugând citate din surse de încredere în conformitate cu liniile directoare privind utilizarea surselor . Urmați sfaturile de proiectare de referință .

Această intrare sau secțiune pe tema geneticii nu este încă formatată conform standardelor . Contribuiți la îmbunătățirea acestuia în conformitate cu convențiile Wikipedia . Urmați sfaturile de proiectare de referință .

Polilinkerul sau situl de clonare multiplă (MCS) este o regiune a plasmidei în care poate fi inserat ADN extern (10-11Kb). Foarte util în experimentele de biologie moleculară . Acest ADN poate fi inserat cu ajutorul unor enzime particulare, numite enzime de restricție. Aceste enzime acționează la nivelul unei secvențe specifice, numite situs de restricție, recunoscând-o și aplicând o tăietură pe firul de ADN, generând fie capete lipicioase, fie capete contondente. În cadrul MCS există site-uri pentru aproximativ 21 de enzime de restricție.

Polilinkerii își găsesc aplicarea în tehnicile de ADN recombinant. În special, acestea sunt utilizate pentru a introduce un ADNc (ADN copiat din ARNm) în interiorul vectorului (de exemplu, plasmidă). Tehnica presupune următorii pași:

1. ) Adăugarea polilinkerilor la ambele capete ale ADNc, în prezența ligazei (nu a ligazei eucariote, deoarece nu este capabilă să sudeze spirale duble, ci doar filamente simple; se utilizează ligaza fagului T4 care în schimb reformează legătura fosfodiester la nivel de elice duble)
2. ) Folosesc o enzimă de restricție pentru secvența de interes conținută în polilinkeri, precum și în vector. Am capete lipicioase în acest fel.

Portalul de biologie : Accesați intrările Wikipedia care se ocupă de biologie