Numărul cel mai probabil
Această intrare sau secțiune pe tema microbiologiei nu menționează sursele necesare sau cei prezenți sunt insuficienți . |
Numărul cel mai probabil (sau MPN , tradus în limba italiană cel mai probabil număr ) sau tehnica de numărare cu mai multe tuburi [1] este o tehnică analitică utilizată pentru a număra sarcina microbiană a unei probe.
Este o metodă de numărare indirectă a încărcăturii bacteriene , în care microorganismele viabile sunt numărate pe baza unei manifestări vizibile de creștere (turbiditate, schimbare a indicatorului etc.). În această metodă statistică , densitatea microorganismelor căutate se obține prin prelucrarea datelor pozitive și negative, obținute dintr-o serie de inoculări ale probei de apă în medii de cultură lichide. Este utilizat în general pentru determinarea colimetriei totale și fecale.
Metodă
Metoda MPN este un test prezumtiv care se efectuează prin inocularea probei care urmează să fie examinată într-o serie de eprubete care conțin lichid din sol .
Cel mai utilizat sistem este cel numit „ simetrie ” și folosește același număr de tuburi pentru fiecare diluare a probei examinate (de obicei se utilizează 3 sau 5 tuburi pe diluție).
Tuburile cu proba și mediul adecvat sunt incubate într-un termostat sau într-o baie de apă în funcție de timpii și temperaturile necesare, apoi citirea se efectuează prin identificarea tuburilor pozitive a trei diluții semnificative ulterioare (pozitivitatea depinde de mediu și reacția necesară). Acestora li se atribuie valoarea 1 în timp ce celor negative li se dă o valoare de 0, după care se adaugă valorile obținute pentru fiecare grup de 3 sau 5 tuburi la aceeași diluție și se compară cu tabelele Mc Crady. Înmulțind valoarea corespunzătoare din tabele cu inversul factorului de diluare, se obține numărul prezumtiv de colonii prezente în proba inițială exprimat în MPN / g sau ml.
- Testul se efectuează în mediu lichid
- Se inoculează serii de eprubete cu diluții zecimale ale probei (test prezumtiv)
- Tuburile prezumtive pozitive sunt însămânțate în medii noi, mai selective (test de confirmare)
- Numărul de teste pozitive pentru fiecare serie de diluții constituie un cod numeric care permite urmărirea celui mai probabil număr de microorganisme pe unitate de volum (valori tabelate - metodă statistică)
Utilizare
Procedură utilizată pentru a estima densitatea unei populații de microorganisme viabile într-o probă dată. Este utilizat în general pentru determinarea colimetriei totale și fecale. Se bazează pe probabilitatea de a detecta dezvoltarea microbiană după cultură în mediu nutritiv lichid din diluții seriale ale unei probe. Dezvoltarea microbiană după incubarea bulionelor inoculate poate fi evaluată:
- observarea posibilelor înnorări ale culturii;
- evaluarea activităților metabolice particulare ale microorganismului sau ale populației microbiene (producția de gaze , acizi etc.).
Proba trebuie diluată în așa fel încât cele mai mari diluții să nu prezinte microorganisme („diluție de extincție”). Cele mai bune rezultate se obțin atunci când toate tuburile inoculate cu cele mai mici diluții sunt pozitive și toate tuburile inoculate cu cele mai mari diluții sunt negative. Bulionul BGBB sau bulion de bilă verde strălucitor (2%), este un bulion de cultură selectiv utilizat pentru identificarea coliformelor fecale din apă, alimente și canalizare. Pentru detectarea Escherichia coli, BGBB inoculat cu coloniile suspecte este incubat la 44 ° C timp de 18 ore. Se observă apoi dacă bulionul a devenit tulbure din cauza creșterii microbiene și se verifică dacă există gaz acumulat în clopotul Durham în interiorul tubului. Este posibil să se efectueze în paralel un test de confirmare suplimentar pentru prezența Escherichia coli printr-un test pentru producerea de indol care se efectuează folosind apă sau triptonat și bulion reactiv Kovacs.
Notă
- ^ Francesco Villani, Numerotarea microorganismelor în mediu lichid: tehnica MPN (Most Probable Number) , pe wpage.unina.it , Universitatea din Napoli Federico II - Departamentul de Știința Alimentelor. Adus la 6 iulie 2018 (arhivat din original la 5 septembrie 2017) .
