Methacarn
Această intrare sau secțiune despre subiectul histologie nu citează sursele necesare sau cei prezenți sunt insuficienți . |
Methacarn este un lichid fixativ alcoolic care este limpede, incolor și foarte volatil la temperatura camerei. Ca orice fixator, acțiunea sa constă în prevenirea decăderii țesuturilor după moarte, descompunerea cauzată de acțiunea bacteriană și autoliza datorată enzimelor. De asemenea, permite menținerea nealterată a relației dintre mediul intra și celular extra. Punctul său de fierbere este calculat în jurul valorii de 64,5 ° C și demonstrează incompatibilitate cu agenți oxidanți precum nitrați, peroxizi, perclorați și acizi precum azotul și sulfuricul.
Este compus din: etanol absolut 60%; 30% cloroform ; 10% acid acetic glacial.
Proprietăți și utilizări
Fixatorii alcoolici, inclusiv Methacarn, acționează prin coagulare sau prin denaturarea proteinelor , modificând ireversibil structura terțiară, astfel încât să creeze noi stabilizări între diferite grupuri de proteine diferite care reacționează între ele formând agregate. Metanolul și etanolul, în special, acționează într-un mod similar cu căldura, provocând o separare a lanțurilor polipeptidice adiacente în urma ruperii și formării de noi legături încrucișate care duc la deshidratare, stabilizând proteinele. Pentru a păstra și structurile celulare, fixativii alcoolici trebuie să mențină un pH fiziologic, posibil în intervalul 7,2 și 7,4.
Methacarn este potrivit atât pentru investigații cito-histologice (dacă este utilizat corect, permite menținerea unei morfologii celulare nealterate), cât și pentru investigații imuno-histochimice, deoarece permite o bună conservare a antigenicității. În special, s-a arătat că fixatorul permite o localizare histochimică bună a diferitelor antigene, inclusiv colagen de tip IV, actină, factorul VIII de coagulare și alfa-fetoproteină. Cu toate acestea, utilizarea sa principală poate fi urmărită până la investigațiile citogenetice, datorită faptului că face posibilă vizibilizarea clară a componentelor nucleare și păstrarea acestora. Diverse studii raportează că integritatea ARN extras din probe fixate în Methacarn este comparabilă cu cea obținută prin supunerea celulelor la înghețarea în azot lichid, deoarece permite păstrarea secvențelor ARN chiar și până la 700 de perechi de baze (bp). Este important să subliniem că această integritate este menținută chiar și după mai mulți ani și că, spre deosebire de conservarea prin îngheț, morfologia celulară este mai bine respectată și structura citoscheletului este păstrată.
Istorie
Carnoy, la sfârșitul secolului al XIX-lea, a pregătit un fixativ citologic pe bază de alcool prin adăugarea unei cantități egale de acid acetic la alcoolul etilic, cu scopul de a hemoliza celulele roșii din sânge și de a face preparatul mai ușor de citit după colorare. S-a constatat că fixatorul a funcționat excelent pentru investigațiile nucleare, deoarece a făcut aceste componente vizibile în mod clar după colorare, dar a păstrat o morfologie celulară redusă, datorită și modificărilor coagulării datorate alcoolului. Pentru a depăși această problemă, s-a adăugat cloroform care, datorită activității sale naturale, a solubilizat membranele și a făcut acțiunea alcoolului mai rapidă, îmbunătățind penetrarea acestuia în celule. Noul fixativ, numit lichidul lui Carnoy, este încă astăzi compus după cum urmează:
- alcool etilic absolut : 6 părți (60 ml); - cloroform : 3 părți (30 ml); - acid acetic glacial : 1 parte (10 ml).
Pentru a asigura o penetrare și mai rapidă a fixativului și a-l face util și pentru preparatele histologice, alcoolul etilic a fost înlocuit cu alcool metilic. Acesta din urmă, fiind cel mai mic dintre alcooli, este supus unei interferențe mai puțin sterice și permite o mai bună depozitare a ADN-ului și ARN-ului care, dacă este supus acțiunii de denaturare a alcoolului etilic, se degradează cu ușurință. Această nouă pregătire a luat numele de Methacarn.
Proceduri
Amestecul Methacarn se deteriorează rapid, prin urmare trebuie preparat înainte de utilizare și, datorită caracteristicilor sale chimico-fizice și a toxicității, trebuie manipulat sub capotă și cu mănuși de protecție. Materialul care trebuie fixat trebuie prelucrat imediat după colectare pentru a menține proprietățile histocitologice nealterate. În cazul probelor histologice, dimensiunea maximă recomandată a secțiunii poate ajunge și la 0,5-1 cm. Volumul de fixator necesar trebuie să fie întotdeauna de 15-20 de ori mai mare decât volumul țesutului. În conformitate cu parametrii optimi, timpul de fixare variază între 4 și 6 ore. Un exemplu clasic este cel al ganglionilor limfatici santinelă care, reduși la secțiuni minute, pot fi fixați complet în 4 ore. În cazul fixării materialului cu dimensiuni mai mari, timpii sunt prelungiți (până la 24-48 de ore) și este necesar să înlocuiți periodic fixatorul utilizat cu unul nou. În cele din urmă, în cazul secțiunilor criostatice, procesul de fixare este foarte rapid (5 minute), dar necesită temperaturi în jur de 4 ° C. Odată ce acest proces este complet, proba continuă până la încorporarea în parafină.
Metacarna nu poate fi concepută ca un detartrat, deoarece acidul acetic conținut în acesta ar trebui să fie într- o soluție apoasă pentru a efectua această acțiune; cu toate acestea, singura sursă de apă disponibilă se găsește în cantități limitate în țesătura însăși. În cazul țesuturilor cu o componentă adipoasă semnificativă, cum ar fi sânii, Methacarn este foarte eficient în îndepărtarea excesului de adipos, datorită cloroformului și a activității sale de lipid solvent. În acest caz, singura măsură de precauție care urmează să fie implementată va fi schimbarea fixativului la jumătatea procedurii cu un alt proaspăt, datorită cantității de lipide care sunt eliberate în soluție.
