Microarray imunologic în suspensie
Microarray-ul imunoanalizării în suspensie este o tehnică care permite analiza simultană a până la 100 de biomolecule diferite ( proteine , peptide sau acizi nucleici ) într-un volum mic de probe biologice.
Principiul de funcționare
Noutatea introdusă prin această analiză se bazează pe utilizarea microsferelor din polistiren (cu diametrul de 5,6 um) la care este legat un anticorp specific pentru analitul care trebuie cuantificat. Aceste microsfere sunt conjugate cu 2 fluorocromi în concentrații diferite, astfel încât să determine până la 100 de regiuni diferite. Prin urmare, fiecare microsferă diferită, determinată de o singură regiune, va fi legată de un anticorp pentru un analit diferit și acest lucru permite detectarea mai multor analiți, până la 100 în aceeași probă. Executarea testului include:
- adăugarea unei combinații a diferitelor microsfere în godeurile unei plăci de testare adecvate și spălarea cu o soluție tampon ; placa utilizată este constituită din puțuri cu fund de filtru care permit spălarea prin aspirare a soluției tampon de jos, astfel încât microsferele să nu fie dispersate;
- adăugarea probelor care conțin analiți necunoscuți și spălarea cu soluția tampon;
- adăugarea unui anticorp secundar conjugat la biotină , acest anticorp leagă analitul într-un site diferit de anticorpul legat de microsferă și spălările relative;
- adăugarea streptavidinei conjugate la un al treilea fluorofor și spălarea relativă
- resuspendarea mărgelelor într-un tampon de citire.
Sala de lectură
Instrumentul, bazat pe tehnologia Luminex xMAP, utilizează același principiu ca și citometrul de flux pentru a detecta reacțiile care apar pe suprafața microsferelor fluorescente . Microsferele sunt aspirate de un ac și duse în camera de lectură unde sunt trecute una câte una și lovite de 2 lasere . Una recunoaște regiunea microsferei și, prin urmare, analitul relativ recunoscut de anticorpul legat de aceasta, va excita cei 2 fluorocromi care o determină, în timp ce celălalt laser o cuantifică, deoarece excită fluoroforul legat de anticorpul secundar.
Aplicații
Testul poate fi efectuat pe supernatante (12 până la 50 μl) de culturi de celule și țesuturi, plasmă , ser , lichid interstițial adipos, lichid de lavaj bronhoalveolar, lichid cefalorahidian, lichid de lavaj nazal, lichid peritoneal și lichid sinovial, precum și în sistemele de șoareci din țesuturile colonului , rinichilor , plămânilor , splinei și ale sistemului nervos . Kituri pentru aplicarea acestei metode sunt disponibile comercial pentru cuantificarea simultană a citokinelor și fosfoproteinelor la oameni, șoareci și șobolani. Mai mult, microsferele pot fi conjugate, datorită reacțiilor chimice simple covalente și stabile, la proteine, peptide, anticorpi, ADN , aptameri sau chiar microorganisme întregi, cum ar fi viruși sau bacterii , pentru a fi utilizate ca sisteme deschise.
Bibliografie
- Wright H și colab., Profilarea citokinelor multiplex a răspunsului terapeutic inițial la pacienții cu infecție cronică cu virusul hepatitei C, Dig Dis Sci 50, 1793-1803 (2005)
- Powell C și colab., Caracterizarea răspunsului inflamator al citokinelor în sângele din cordonul ombilical pe termen lung stimulat, J Perinat Med 32, 440-445 (2004)
- Ishizu T și colab., Activarea intratecală a axei IL-17 / IL-8 în scleroza multiplă opticospinală, Brain 128, 988-1002 (2005)
- Elkord E și colab., Metodele de izolare a monocitelor umane influențează producția de citokine din celule dendritice generate in vitro, Imunologie 114, 204-212 (2005)