Imunotest enzimatic
Această intrare sau secțiune pe tema procedurilor de diagnostic nu citează sursele necesare sau cei prezenți sunt insuficienți . |
Imunotestele enzimatice sunt teste care sunt utilizate pentru a detecta prezența anticorpilor sau antigenelor într-o probă , de obicei în sânge . Acest lucru permite, de exemplu, să se constate că a apărut o infecție .
Descriere
Pentru a identifica un anumit anticorp se utilizează antigenul , împotriva căruia este îndreptat acest anticorp, care se va lega de acesta, dacă este prezent. Sau, într-o imagine în oglindă, un anumit anticorp poate fi utilizat pentru a detecta antigenul necunoscut. Această interschimbabilitate a antigenilor și anticorpilor ca liganzi și ca detectoare explică versatilitatea enormă a tehnicilor imunoenzimatice.
Prezența complexului antigen-anticorp astfel format, făcută vizibilă prin procedee particulare, este o indicație a prezenței anticorpului sau a antigenului căutat.
O caracteristică particulară a imunoanalizelor enzimatice (unite prin abrevierea generică EIA: Enzyme Immuno Assay) este aceea a exploatării cuplate a unei reacții imunologice (legătura antigen-anticorp) pentru a lega selectiv molecula cercetată și a unei reacții enzimatice pentru a produce o culoare ușor măsurabilă. semnal.cu ochi sau cantitativ cu fotometre speciale. Componenta imunologică a testului asigură specificitatea acestuia, în timp ce componenta enzimatică asigură sensibilitatea sa analitică.
Ulterior, menținând ferm conceptul general de utilizare a unei reacții antigen-anticorp, alte tehnologii analitice au înlocuit detectarea enzimatică, obținând avantaje de sensibilitate, linearitate sau practicabilitate. Aceste tehnologii (denumite cumulativ "imunometric") pot utiliza, de exemplu, semnale radioactive sau fluorescente, în teste care sunt numite respectiv RIA (Radio Immuno Assays) sau FIA (Fluoro Immuno Assays).
Elementul cheie pentru dezvoltarea imunoanalizelor enzimatice a fost capacitatea tehnologică, răspândită din deceniul 1970-1980, de a lega o moleculă de anticorp cu o moleculă enzimatică, prin intermediul unor legături covalente stabile, astfel încât în noua moleculă de sinteză („ conjugat ") atât anticorpul, cât și enzima și-au menținut funcțiile specifice.
Într-un sistem imunoenzimatic tipic, schematic, sunt întotdeauna întâlnite următoarele componente: 1) ligandul, care este molecula de căutat; 2) conjugatul, care este anticorpul legat de enzima detector; 3) substratul cromogen, care este o moleculă incoloră care este atacată de enzimă și împărțită în două produse, dintre care unul este vizibil colorat.
Păstrând încă conceptul cheie al conjugării într-o nouă moleculă de funcții imunologice și enzimatice, testele au fost apoi implementate în numeroase variante tehnice, caracterizate prin diverse acronime, toate având ca scop rezolvarea într-un mod mai mult sau mai puțin strălucitor a principalei probleme analitice ridicate de acest lucru. tehnologie, care este - după incubarea reactivului imunoenzimatic cu analitul necunoscut - să distingem anticorpul care a rămas liber de anticorpul care s-a legat în schimb de molecula căutată, semnalând prezența acestuia.
În practică, două abordări distincte sunt folosite pentru a distinge anticorpul liber de cel legat, numit „analiză de fază eterogenă” și „analiză de fază omogenă”.
În testele în faza eterogenă, îndepărtarea fizică a componentei nelegate are loc prin intermediul procedurilor de spălare sau centrifugare. Prin urmare, aceste proceduri necesită etape suplimentare, care trebuie efectuate manual sau cu analizoare dedicate scopului specific.
În testele de fază omogene, componentele libere și legate rămân în soluție în aceeași cuvă de incubație, dar se disting pe baza diferențelor specifice de comportament introduse de legătură. De exemplu, în tehnologia EMIT, utilizată în anii 1980 pentru dozarea medicamentului, după legare, enzima este inactivată și nu mai generează un semnal. Pe de o parte, tehnologiile în fază omogenă sunt mai rafinate și mai scumpe, pe de altă parte, permit utilizarea instrumentelor fotometrice automate comune de chimie clinică.
Exemple de imunoanalize enzimatice sunt:
