Traducere Nick
Metoda de traducere Nick este o tehnică de laborator de biologie moleculară care este utilizată pentru a marca ADN-ul sau pentru a crea sonde radioactive care pot fi utilizate ulterior pentru experimente precum secvențierea unui tract de acid nucleic. Caracteristica care o distinge este aceea de a fi o tehnică capabilă să marcheze până la întregul filament în cauză, spre deosebire de alte tehnici de marcare care implică în primul rând capetele 5 'P sau 3' OH ale filamentului. 32 P marcate pe fosfatul deoxiribonucleotid α sunt alese pentru marcarea izotopilor radioactivi ai fosforului.
Având în vedere radioactivitatea tehnicii, s-a preferat utilizarea în locul dezoxiribonucleotidelor legate de molecule care acționează ca fluorofori , în locul izotopilor radioactivi ai fosforului, prin urmare capabili să arate fluorescență dacă sunt supuși unei iluminări adecvate în analiză.
Metoda folosește o secvență de ADN dublu catenar, care, odată purificat, este tăiată cu o endonuclează a -specifică, cum ar fi ADNse capabilă să provoace pauze monocatenare, în jargonul numit nick-ul lor, generat de ruperea legăturilor fosfodiester . Prezența unui nick este substratul de reacție pentru DNApolI , care începând de la punctul de rupere începe să integreze treptat dNTP-urile marcate prin înlocuirea nucleotidelor nemarcate prezente: capacitatea de îndepărtare, numită activitate de exonuclează 5'în jargon este o caracteristică intrinsecă și distinctivă din această ADN polimerază dependentă de ADN.
Reacția poate fi controlată prin inhibarea chimică a enzimei, prin introducerea tris-EDTA în soluție: aceasta determină denaturarea amestecului enzimatic care duce la sfârșitul reacției.
Bibliografie
- Benjamin Lewin, Gena VIII, paginile 408-409.
