SILAC
Această intrare sau secțiune pe tema chimiei analitice nu citează sursele necesare sau cei prezenți sunt insuficienți . |
SILAC ( marcarea stabilă a izotopilor cu / cu aminoacizi în cultura celulară ) este o tehnică bazată pe spectrometrie de masă care are ca scop dezvăluirea diferențelor cantitative în distribuția proteinelor între mai multe probe folosind etichetarea non-radioactivă, care utilizează markeri ca izotopi grei .
Procedură
Două populații de celule sunt cultivate în două medii de cultură diferite. Unul dintre ei conține aminoacizi obișnuiți, în timp ce celălalt conține aminoacizi marcați cu izotopi grei stabili, de exemplu arginină marcată cu 6 atomi de carbon-13. În acest fel, atunci când celulele cresc în mediul de cultură cu arginină grea, o vor încorpora și, în consecință, proteinele sintetizate vor conține și aminoacidul marcat. Din aceasta rezultă că dacă într-o probă arginina va avea o anumită greutate, în cealaltă va avea o greutate crescută cu 6 Da. Avantajul acestei metode este că proteinele din ambele culturi pot fi amestecate și colectate într-o singură eșantion și analizat simultan cu spectrometrul de masă. Acest lucru se datorează faptului că putem diferenția proteinele marcate de cele nemarcate datorită diferenței lor de masă datorită prezenței argininei marcate. Vârfurile relative la cele două proteine vor fi deci deplasate de-a lungul dimensiunii m / z.
De asemenea, vom putea urmări cantitățile celor două proteine din cele două probe, examinând raportul dintre vârfurile corespunzătoare de proteine marcate / proteine nemarcate.
Aplicații
- Studiul căilor metabolice;
- Studiul căilor de secretom și de excreție, apoi studii privind semnalizarea intercelulară;
- Studiul modificărilor post-translaționale, în special a fosforilării .
Silac pulsat
În tehnica pSILAC, celulele unui control și o probă, de exemplu, cresc mai întâi în două medii de cultură ușoare, apoi cu aminoacizi nemarcați, apoi vor fi tratați: o populație de celule este transferată într-un mediu de cultură cu M- aminoacizii marcați și celălalt mediu este transferat într-un mediu cu aminoacizi grei în schimb. Raportul dintre vârfuri în raport cu izotopii grei și grei mediu ne va oferi informații directe cu privire la diferențele dintre sinteza proteinelor într-o stare și alta. Acest lucru permite monitorizarea diferențelor în sinteza de novo a proteinelor într-o probă și alta.
