Site de restricție
Această intrare sau secțiune despre genetică nu citează sursele necesare sau cei prezenți sunt insuficienți . |
Un situs de restricție este definit ca o anumită secvență de ADN (4 până la zeci de perechi de baze în lungime) recunoscută de o enzimă de restricție sau endonuclează ca punctul în care trebuie tăiată molecula de ADN. Aceste site-uri sunt de obicei secvențe palindrome și cu o secvență foarte precisă. O enzimă de restricție poate tăia în sau în apropierea unor astfel de secvențe, în timp ce în cazul enzimelor de restricție de tip III, secvența consens poate fi chiar la câteva sute de baze distanță.
Un exemplu de sit de restricție pentru o endonuclează de tip II
5 '... GAATTC ... 3'
||||||
3 '... CTTAAG ... 5'
- În acest caz, situl de restricție coincide cu locul tăiat: enzima EcoRI produce o tăietură eșalonată creând două capete (denumite coezive ) cu un singur filament la 5 ':
5 '... G AATTC ... 3'
| |
3 '... CTTAA G ... 5'
Siturile de restricție sunt de secvențe normale de baze , lungi de la 4 până la câteva zeci de perechi de baze, pentru care puteți găsi mai mult sau mai puțin ușor în genom . Sute de secvențe de consens specifice pentru una sau mai multe enzime au fost descoperite și documentate până acum.
Utilizare în biologia moleculară
Cunoașterea secvențelor siturilor de restricție a endonucleazei este de o importanță fundamentală în biologia moleculară , deoarece a permis dezvoltarea diferitelor tehnici, inclusiv clonarea .
Cea mai comună este enzima EcoRI , capabilă să recunoască secvența G ^ AATTC / CTTAA ^ G (cu ^ indicând locul de tăiere) lăsând capete proeminente (o porțiune terminală a moleculei de ADN fără baze complementare ), AATT, cunoscută sub numele de lipicioasă sfârșit . În biologia moleculară aceste capete sunt folosite pentru a lega, printr-o ADN ligază , fragmentul obținut cu unul digerat cu aceeași enzimă și care, prin urmare, va avea aceleași capete proeminente, ca în cazul clonării . Nu toate enzimele produc acest tip de capăt: unele formează capete trunchiate, cunoscute în engleză ca capete contondente .
