Tampon TBE
Această intrare sau secțiune despre subiectul biochimiei nu citează sursele necesare sau cei prezenți sunt insuficienți . |
Tamponul TBE este o soluție tampon utilizată la prepararea gelurilor electroforetice de agaroză pentru separarea fragmentelor de ADN rezultate din amplificarea PCR , protocoalele de purificare și experimentele de clonare .
Acesta constă dintr - o soluție de Tris- borat - EDTA și EDTA sechestrelor cationi bivalenți . Tamponul TBE este deosebit de util în separarea fragmentelor mici de ADN ( greutate moleculară <1000), de exemplu produse mici rezultate din digestie cu enzime de restricție .
TBE are o capacitate de tamponare mai bună și oferă o rezoluție mai precisă decât bufferul TAE. TBE este, în general, mai scump decât TAE și inhibă ADN ligaza, care poate provoca probleme dacă doriți să continuați cu purificarea sau ligarea ADN-ului.
Pregătirea
Pentru a prepara 1 litru de TBE ICI 10X (utilizat în gelurile de agaroză) se utilizează următoarele:
- 162 g bază Tris ( tris (hidroximetil) aminometan )
- 46,3 g acid boric
- 9,5 g sare disodică EDTA
- H 2 O cu un volum final de 1000 ml
PH-ul stocului trebuie să fie de 8,8.
Pentru a prepara 1 litru de TBE 10X (utilizat în gelurile de acrilamidă) se utilizează următoarele:
- 107,81 g Tris bază (tris (hidroximetil) aminometan)
- 55,04 g acid boric
- 3,72 g sare disodică EDTA
- H 2 O cu un volum final de 1000 ml
PH-ul stocului trebuie să fie 8,3.
Sarea disodică a EDTA nu se solubilizează până când soluția nu a atins un pH de aproximativ 8,0 prin adăugarea de NaOH .
