Dot blot
Această intrare sau secțiune despre biotehnologie nu menționează sursele necesare sau cei prezenți sunt insuficienți . |
Dot blot este o biochimic tehnică care, prin exploatarea ADN / hibridizare ADN, scoate în evidență prezența unei gene într - un anumit organism.
Reprezintă o simplificare a metodei Western Blot , cu excepția faptului că proteinele de detectat nu sunt mai întâi separate prin electroforeză . În schimb, proba este aplicată direct pe o membrană într-un singur punct și se efectuează procedura de absorbție.
Tehnica oferă economii semnificative de timp, cum ar fi cromatografia pe gel sau electroforeza , și nu sunt necesare proceduri complexe de absorbție a gelului. Cu toate acestea, nu oferă informații cu privire la dimensiunea proteinei țintă. [1]
Metodă
Celulele eșantionului sunt de obicei fixate pe un filtru de nailon sau nitroceluloză , care este plasat pe un pachet de hârtie de șters. După plasarea acestuia din urmă într-un recipient cu lichid litic pentru membranele celulare (și / sau pereții bacterieni), ADN-ul este fixat pe suport, inducând formarea dimerilor de timină datorită expunerii la razele UV . În cele din urmă, este denaturat prin adăugarea de sodă caustică (căldura nu poate fi utilizată ca agent de denaturare, deoarece ar putea compromite integritatea filtrului). Apoi continuăm cu inserarea sondelor ADN marcate cu un fluorocrom , care sunt capabile să recunoască o secvență specifică; acestea se vor lega cu secvența lor complementară și după autoradiografie vor evidenția, prin emisia de fluorescență , care dintre celulele inițiale deținea gena obiect al cercetării.
Aplicații
Rularea unui punct blot este similară ideii cu rularea unui western blot, cu avantajul unei viteze mai mari și a costurilor mai mici.
Punctele punct sunt, de asemenea, efectuate pentru a evalua capacitățile de legare ale unui anticorp. [2]
Notă
- ^ Western Blot: Test Blots, Slot Blots și Dot Blots .
- ^ Kevin R. Rupprecht, Rad K. Nair și Larissa C. Harwick, Dezvoltarea unui test dot-blot pentru screeningul anticorpilor monoclonali împotriva medicamentelor cu masă moleculară mică , în Biochimia Analitică , vol. 407, n. 2, 15 decembrie 2010, pp. 160–164, DOI : 10.1016 / j.ab.2010.08.003 . Adus la 11 noiembrie 2019 .
