Testul KRAS
Testul KRAS este primul test genetic care permite să se determine, în momentul diagnosticului, starea genei care codifică proteina KRAS, indiferent dacă este normală sau mutată, în cancerul colorectal al unui pacient. Testul identifică apoi un biomarker al cancerului, proteina KRAS, care poate prezice răspunsul cancerului colorectal la terapii personalizate.
Această determinare este esențială deoarece starea proteinei KRAS poate influența prognosticul bolii și răspunsul la tratamentele care vizează inactivarea receptorului factorului de creștere epidermic (EGFR). Prin urmare, medicul poate alege mai bine dacă supune sau nu un pacient unui anumit tratament cu substanțe biologice care vizează inactivarea factorului de creștere epidermică EGF.
Testul KRAS
Starea sau forma proteinei KRAS poate fi identificată cu testul Kras, un test simplu, neinvaziv, care analizează ADN extras din celulele canceroase din probe de țesut prelevate în timpul unei biopsii sau alte analize. Prezența genei KRAS mutante în celulele canceroase este detectabilă prin mai multe metode:
- PCR cantitativă ( reacția în lanț a polimerazei ) (qPCR), care amplifică selectiv ADN - ul genei KRAS, este o metodă foarte sensibilă și specifică pentru determinarea prezenței KRAS mutant;
- Secvențierea permite evaluarea, după amplificarea genei, a mutațiilor prezente. În acest caz, cele mai utilizate metode sunt Sanger și Pyrosequencing .
Avantajul secvențierii este că pot fi detectate chiar mutații necunoscute, în timp ce cu PCR cantitativă sunt detectabile doar mutațiile cunoscute.
Fiind țesuturi tumorale, este foarte important să se evalueze sensibilitatea metodelor utilizate. Dacă secvențierea Sanger recunoaște cel puțin 20 de celule mutante din 100, Pirosequencing are o sensibilitate mai mare, ajungând la 5 din 100.
Procedura de laborator
Procedura de laborator utilizată pentru a determina starea KRAS poate fi rezumată în șase etape succesive:
- Înainte de a începe testul KRAS, un patolog selectează dintr-o alunecare proba de țesut cu o cantitate suficientă de celule tumorale, din care să extragă ADN-ul pe care să efectueze testul KRAS.
- Proba de țesut este ulterior îndepărtată din lamă pentru a permite efectuarea testului și pentru a determina „starea” KRAS.
- ADN-ul țesutului tumoral este purificat din proba de țesut.
- ADN-ul țesutului tumoral este verificat pentru puritate în conformitate cu procedurile de control al calității.
- PCR este un test foarte sensibil și specific, care amplifică ADN-ul și poate permite determinarea, utilizând sonde specifice, a prezenței KRAS mutante.
- Produsul de amplificare poate fi utilizat pentru una dintre metodele de secvențiere sau măsurate pentru a verifica dacă tumora exprimă o genă KRAS normală sau mutantă. În acest fel, pe baza stării KRAS a tumorii, este posibilă personalizarea terapiei pentru a fi administrată pacientului.
Bibliografie
- Lièvre A, Bachet JB, Le Corre D și colab. Starea mutației KRAS este predictivă a răspunsului la terapia cu cetuximab în cancerul colorectal. Cancer Res 2006; 66: 3992-5.
- Lièvre A, Bachet JB, Boige V și colab. Mutațiile KRAS ca factor de prognostic independent la pacienții cu cancer colorectal avansat tratați cu cetuximab. J Clin Oncol 2008; 26: 374-9.
- Tabernero J, Cervantes A, Ciardiello F și colab. Corelația eficacității cu starea KRAS la pacienții cu cancer colorectal metastatic, tratați cu programe săptămânale (q1w) și q2w ale cetuximab combinate cu FOLFIRI. Prezentat la: American Society of Clinical Oncology 2008 Gastrointestinal Cancers Symposium; 25-27 ianuarie 2008, Orlando, FL. Rezumat 435.
- Loupakis F, Ruzzo A, Cremolini C, Vincenzi B, Salvatore L, Santini D, Masi G, Stasi I, Canestrari E, Rulli E, Floriani I, Bencardino K, Galluccio N, Catalano V, Tonini G, Magnani M, Fontanini G , Basolo F, Falcone A, Graziano F. KRAS codonul 61, 146 și mutațiile BRAF prezic rezistența la cetuximab plus irinotecan în codonul KRAS 12 și 13 cancer colorectal metastatic de tip sălbatic Br J Cancer. 18 august 2009; 101 (4): 715-21. Epub 2009 14 iulie.
- Sandrine Duforta, Marie-Jeanne Richarda și Florence de Fraipont Metodă de pirosecvențiere pentru a detecta mutația KRAS în țesuturile tumorale fixate în formalină și încorporate în parafină [ link rupt ] Biochimie analitică Volumul 391, Ediția 2, 15 august 2009, paginile 166-168