Amplificator de capcane
Amplificatorul capcanei este o tehnică de laborator genetic și face parte din tehnicile de mutageneză a capcanei (care include capcana genică și capcana promotorului ). Această tehnică este utilă pentru „pescuitul” secvențelor de reglare într-o secvență ADN . Capcana de amplificare este o construcție care ia numele unui vector în care există o genă raportor care va fi exprimată numai dacă vectorul se va insera în vecinătatea secvenței ADN care este decisă să „capteze”. Scopul experimentului nu este de a captura un anumit amplificator, ci de a găsi orice amplificator; tehnica de captare a amplificatorului este mult mai eficientă decât capcana promotorului, deoarece amplificatorii funcționează și bidirecțional și de la distanță.
Descrierea tehnicii
Construcția utilizată este în general formată: de un promotor minim care nu permite o expresie detectabilă a genei raportoare (care poate fi lac Z sau GFP (gena raportor este plasată la sfârșitul construcției pentru a o face la fel de sensibilă ca este posibil când este amplasat în apropierea unui amplificator; nu este niciodată plasat în centru)), capetele construcției sunt capetele unui element transpozabil care împiedică ruperea constructului după inserare. Constructul se inserează de la extremitățile sale în același mod ca și retrovirusurile. Această inserție, care are loc la întâmplare, poate determina exprimarea sau nu a genei raportoare, în funcție de faptul dacă este inserată în vecinătatea unui amplificator. Când apare expresia genei raportor, se are cheia de acces pentru a accesa atât secvențele reglatoare, cât și gena pe care acele secvențe o reglează. Deoarece construcția genei raportoare poate fi identificată cu o sondă , este suficient să vă deplasați la stânga și la dreapta pentru a găsi, cu studii adecvate ale ORF-urilor și analiza situsurilor de legare a proteinelor reglatoare, a potențatorilor și genelor de interes. După ce a identificat întinderea de ADN care funcționează ca un amplificator, este posibil apoi să-l recupereze prin clonarea imediată cu tehnica de salvare a plasmidelor .
