MR-VP
Această intrare sau secțiune pe tema microbiologiei nu menționează sursele necesare sau cei prezenți sunt insuficienți . |
Mediul Proskauer Metil Red Voges ( MR-VP ) este un mediu diferențial dezvoltat de Clark și Lubs folosit pentru a diferenția și uneori pentru a diferenția enterobacteriile . MR-VP conține 3 substanțe esențiale pentru dezvoltarea organismelor bacteriene, cum ar fi peptona , glucoza și K2HPO4. Bacteriile MR pozitive (cum ar fi Escherichia coli ) au capacitatea de a fermenta glucoza cu producția de acid lactic , acid succinic , acid acetic și acid formic ; Aceste produse metabolice au particularitatea de a rămâne stabile în timpul incubației și astfel produc o rată ridicată de ioni de hidrogen . Bacteriile MR negative (cum ar fi Enterobacter aerogenes ) au capacitatea de a produce acid lactic, acid acetic și acid formic; aceste produse metabolice au particularitatea de a nu rămâne stabile în timpul incubației și astfel produc o rată scăzută de ioni de hidrogen, sunt transformate în carbonați și dioxid de carbon . Acidul acetic , la pH 6,3 este transformat în acetoină sau 2-3 butilen glicol . Uneori se obține o inversare alcalină a solului datorită proteinelor care efectuează un atac catabolic cu producerea compușilor de amoniac. Cele 2 rezultate pot fi diferențiate prin adăugarea indicatorului roșu fenol , care este colorat în funcție de aciditatea substanțelor produse (roșu sau galben). În testul VP, se diferențiază microorganismele care fermentează glucoza cu producția de substanțe acide sau cu producția de acetoină ( metilacetilcarbonol ). Acetoina, prezentă în cultură , este oxidată la diacetil de oxigenul atmosferic, într-un mediu alcalinizat prin adăugarea celui de-al doilea reactiv: KOH 0,2 ml ( hidroxid de potasiu ). Diacetilul reacționează cu primul reactiv adăugat: a -naftolul 0,5 ml și o culoare roșie vor fi produse pentru reacțiile pozitive și o culoare maro pentru reacțiile negative. Reactivii trebuie adăugați strict în următoarea ordine, mai întâi a-naftol solubilizat în alcool etilic rece, apoi baza solubilizată în apă rece.
Utilizare
Pentru efectuarea celui de-al doilea test, este necesar în primul rând să se semene (inoculează) o tulpină pură MR-VP, prin stemperamento . Pentru testul cu roșu de metil (MR), este necesar să așteptați 5 zile de incubație la 30 ° C, pentru testul Voges Proskauer (VP), durează 24 de ore la 35 ° C.
Efectuarea testului de metil roșu (MR)
La 5 ml de cultură de bulion în mediu MR-VP adăugați 5 picături de roșu de metil. Pentru a prepara soluția roșu de metil: se dizolvă 0,1 g de roșu metilic în 300 ml alcool etilic 95% și se completează până la 500 ml cu apă distilată .
Efectuarea testului Voges Proskauer (VP)
Testul implică prepararea următoarelor soluții: 1) creatină monohidrat (N-amidosarcozină): se dizolvă 0,5 g în 100 ml în apă distilată. 2) a-naftol: se dizolvă 6g de a-naftol în 100 ml alcool etilic 96% (V / V). Pregătiți soluția în ziua testului. 3) KOH: dizolvați 40g de KOH în 100 ml de apă distilată. La 3 ml de bulion, adăugați 2 picături de creatină, 3 picături de soluție de naftol și 2 picături de KOH. Pozitivul testului de la dezvoltarea unei culori roz sau roșu aprins, după așteptarea a 15 minute de la adăugarea reactivilor .
depozitare
A se păstra la 10-30 ° C departe de lumină , într-un loc uscat. În acest fel, suportul este utilizabil până la data de expirare indicată pe borcan , dar nu utilizați după acea dată. În cazul în care există o deteriorare evidentă a pulberii (schimbarea culorii, întărirea pulberii etc ...). Tuburile care conțin mediul pot fi depozitate timp de până la 7 zile la 2-8 ° C.
Siguranța și precauția operatorului
Solul (pregătit) nu este clasificat ca periculos și nici nu conține substanțe periculoase cu concentrații> 1%. La fel ca pentru toate tipurile de soluri sub formă de pulbere, pentru manipularea acestuia este recomandabil să folosiți protecție respiratorie (măști sau filtre cu cărbune activ). Preparatul trebuie utilizat numai în laborator, în asepsie completă, pentru a evita contaminarea de către agenții patogeni externi.
