Vectorii de clonare
Această intrare sau secțiune despre biologie nu citează sursele necesare sau cei prezenți sunt insuficienți . |
Vectorii de clonare sunt anumite molecule de ADN , naturale sau chiar artificiale, utilizate în tehnologiile de clonare moleculară. Există diferite tipuri de vectori de clonare. Cele mai simple și, de asemenea, cele mai frecvent utilizate, sunt: 1) vectori de plasmide, 2) vectori de fagi sau bacteriofagi , 3) vectori de cosmide sau cosmide . Există, de asemenea, alte tipuri de vectori de clonare care sunt folosiți pentru a satisface nevoi speciale (de exemplu, cromozomii artificiali ai drojdiilor , cunoscuți prin acronimul YAC, care sunt utilizați pentru a clona segmente lungi de ADN - peste 100 Kbp )
Vectorii plasmidici
Plasmidele sunt elemente genetice ale ADN-ului, circulare și extracromozomiale, care se replică autonom în raport cu cromozomul bacterian. Au fost folosite pentru a realiza prima clonare ADN, care a avut loc în anii 1970. Pe scurt, clonarea vectorului plasmidic constă în tratarea atât a plasmidei, cât și a ADN-ului care trebuie clonat folosind aceeași enzimă de restricție . În acest fel, vectorul plasmidic este linearizat, adică își pierde structura circulară normală și este gata să găzduiască molecula de ADN exogenă din interior, care este ligată împreună cu plasmida liniarizată de enzima ADN ligază . Plasmida cu ADN exogen se numește plasmidă recombinantă . Aceasta este transferată în cele din urmă către o celulă gazdă adecvată (de obicei celule bacteriene ) care este capabilă să producă sute de copii ale fragmentului de ADN clonat.
Vectorii fagului
Vectorii fagici sunt derivați din bacteriofagi , în special virusuri care parazitează bacteriile . Cel mai utilizat este fagul λ , un bacteriofag care are ca gazdă naturală bacteria Escherichia coli . Pe scurt, clonarea prin intermediul fagului λ exploatează capacitatea naturală a acestui virus de a-și integra propriul ADN în genomul bacteriei. ADN-ul care trebuie clonat este inserat într-o regiune adecvată a ADN-ului viral prin diferite tehnici. Cu proceduri complexe, in vitro, este astfel posibil să se producă mii de viruși λ recombinați, care transportă ADN-ul exogen inserat în ADN-ul lor, gata să infecteze cât mai multe bacterii.
Cosmide
Sunt vectori de clonare care combină avantajele vectorilor plasmidici și vectorilor fagici.
