Placarea replicilor
Tehnica de placare a replicilor (replica de placare în limba engleză) a fost dezvoltată în 1952 de Joshua și Esther Lederberg . Prin această tehnică este posibil să se obțină un număr variabil de cutii Petri care conțin un mediu de cultură solid (de obicei agar agar ) pe care sunt cultivate colonii bacteriene : coloniile au același aranjament spațial pe toate plăcile. În acest fel există multe plăci clone , toate identice una cu alta.
Proceduri de placare
Începe cu o capsulă inițială ( placa primară ) care conține mediul și un anumit număr de colonii celulare care trebuie studiate; un disc acoperit cu un strat de catifea sterilă, o membrană de nitroceluloză sau un filtru de hârtie este așezat ușor pe placă, pentru a face ca câteva celule să adere la ea pentru fiecare colonie. Pânza sau filtrul sunt apoi presate pe alte plăci sterile (plăcile secundare ): în acest fel celulele sunt depuse pe mediu și, după perioada de incubație, vor genera colonii așa cum au fost aranjate în placa primară. Această tehnică este utilizată în principal atunci când numărul de colonii este cuprins între 30 și 300 de unități: cu un număr mai mare, placarea manuală este lentă și mai predispusă la erori.
Istorie
Inițial tehnica a fost dezvoltată pentru a studia mecanismul prin care își au originea unele mutații genetice . Bacteriofagii au fost inoculați pe plăci secundare care conțin tulpini de Escherichia coli : așa cum se știa chiar înainte de acest experiment, unele (deși puține) colonii au reușit să supraviețuiască infecției virale; acest lucru s-a datorat mutațiilor rare care au făcut tulpinile rezistente la fag. Ceea ce a vrut să afle experimentul a fost dacă aceste mutații au fost generate aleatoriu sau dacă apariția lor a fost cumva influențată de prezența fagilor. Cu alte cuvinte, dacă mutațiile au fost spontane sau dacă au fost induse de fagi (sau alte modificări de mediu). În urma infectării diferitelor plăci s-a obținut că coloniile supraviețuitoare erau întotdeauna la fel, adică dispuse în același mod pe plăci: acest lucru nu putea fi explicat decât prin ipoteza că o mutație spontană care conferă rezistență a avut loc, întâmplător, în coloniile plăcii primare și apoi a fost transmisă în cele secundare. Dacă mutația s-ar fi produs după placare, ar fi afectat în schimb colonii diferite (probabilitatea ca mutațiile să afecteze întotdeauna aceleași colonii este statistic foarte scăzută).
Alte utilizări
Ulterior, placarea replicilor a devenit un instrument important în biologia moleculară pentru a efectua așa-numitul screening genetic , adică pentru a putea izola coloniile cu caracteristici fenotipice interesante într-o populație bacteriană. De exemplu, coloniile pot fi placate în plăci secundare cu medii selective: în acest fel, tulpinile auxotrofice sau rezistente pot fi izolate. Prin creșterea varietății plăcilor secundare cu medii cu selectivitate diferită, este posibil să se testeze un număr mare de colonii pentru atât de mulți fenotipuri câte plăci secundare există.
Placarea este utilă și pentru așa-numita selecție negativă . De exemplu, dacă coloniile care sunt sensibile la antibioticul ampicilină trebuie izolate, coloniile sunt plasate în plăci secundare Amp + (adică cu ampicilină). Coloniile sensibile vor muri, dar pot fi identificate în continuare pe placa primară. Aceste colonii pot fi apoi preluate (pickate) de pe placa primară și analizate separat.
Bibliografie
- ( EN ) Lederberg, J și Lederberg, EM (1952) Replicare și selecție indirectă a mutanților bacterieni. J Bacteriol . 63 : 399-406. ( Text integral )
- Anthony FJ Griffiths, genetică. Principiile analizei formale. , Zanichelli, 2006
