Isoelectrofocus
Această intrare sau secțiune despre subiectul biochimiei nu citează sursele necesare sau cei prezenți sunt insuficienți . |
Focalizarea isoelectrică (IEF) este o tehnică electroforetică prin care proteinele se separă pe un suport solid, de multe ori un gel, pe baza punctului lor izoelectric . Prin urmare, această tehnică este utilizată atât pentru separarea proteinelor, cât și pentru a determina punctul izoelectric al acestora prin exploatarea capacității acestei tehnici de a discrimina punctele izoelectrice care diferă chiar cu doar 0,01 unități.
Un gradient de pH este creat pe gel datorită amestecurilor de amfoliți care, odată ce se aplică un câmp electric , se dispun între anod (soluție acidă) și catod (soluție bazică), dând în acel moment un pH egal cu punctul lor izoelectric ( pI). Pe piață există amestecuri de amfoliți care acoperă pH-ul cuprins între 3 și 11, permițând analiza unei largi varietăți de proteine.
Atunci când un amestec de proteine este analizat cu această metodă, proteinele vor tinde să migreze către anod sau spre catod în funcție de sarcina lor netă care, în același timp, se va modifica datorită variației pH-ului conferită de amfoliți; migrarea va continua până când fiecare proteină se află în punctul său izoelectric sau sarcina sa netă va fi egală cu 0.
Atâta timp cât este aplicat un câmp electric, efectul difuziei proteinelor asupra suportului solid va fi eliminat, deoarece difuziunea este opusă de forța electromotivă care aduce fiecare proteină înapoi la pI-ul său, obținând astfel benzi foarte bine rezolvate.
linkuri externe
- ( EN ) Isoelectrofocusing , în Encyclopedia Britannica , Encyclopædia Britannica, Inc.
