Cromatografia în strat subțire
Cromatografia în strat subțire sau TLC , acronim al cromatografiei englezești în strat subțire , este o tehnică cromatografică de pregătire simplă și execuție rapidă; acest lucru îl face deosebit de potrivit pentru efectuarea de evaluări calitative sau semicantitative, precum și pentru urmărirea unei reacții chimice pe măsură ce se desfășoară.
Ca toate cromatografiile, se bazează pe distribuția diferită a diferitelor substanțe între o fază staționară și o fază mobilă, în funcție de afinitatea fiecărei substanțe cu acestea.
Faza staționară este în general un strat care are o grosime uniformă de aproximativ 1 mm de material adsorbant , depus pe o placă de sticlă . [1] Materialul adsorbant poate fi silicagel , alumină , pulbere de celuloză sau pământ de diatomee ( kieselguhr ), în funcție de aplicația necesară.
Faza mobilă este un solvent ales în mod corespunzător (sau un amestec de solvenți), capabil să separe componentele amestecului care urmează a fi analizat și nu foarte similar în polaritate cu faza staționară aleasă.
Execuţie
Un strat de fază mobilă de aproximativ 1 cm înălțime este plasat pe fundul unui recipient, în care este scufundat capătul inferior al plăcii de sticlă pregătită cu materialul adsorbant, pe care se separă o picătură de probă (sau de o soluție ). Camera de dezvoltare este apoi închisă pentru a menține mediul saturat cu vapori de solvent.
Datorită efectului de capilaritate , solventul se ridică de-a lungul plăcii, trăgând componentele amestecului cu el într-un mod diferit și separându-le. Efectul solventului poate dura de la zece minute la peste o oră.
Dacă separarea nu a fost suficientă, se poate utiliza o separare bidimensională: în acest caz placa este de formă pătrată și într-un colț al acesteia soluția care trebuie separată se depune într-un singur punct. După ce se procedează cu separarea ca de obicei, placa este rotită astfel încât componentele separate să fie de-a lungul unei linii orizontale, apoi se efectuează o nouă separare cu un solvent diferit.
Procedând în acest fel, este posibil să se separe substanțele care sunt foarte asemănătoare între ele și care nu se separă altfel.
Dacă nu este posibilă observarea directă a petelor specimenului de pe suprafața plăcii - un caz foarte frecvent - este posibil să se recurgă la observarea sub lumină ultravioletă sau la reacția cu reactivi care dezvoltă compuși colorați. [2] [3] Acestea includ iod , reactivul para- anisaldehidă (soluție de p- anisaldehidă, acid sulfuric și acid acetic în etanol), soluția Pancaldi (un amestec oxidant pe bază de săruri de ceriu și molibden ), ninhidrină , pentru a dezvălui amino acizi evidențiindu-i cu diferite culori (galben și diferite nuanțe de violet).
Pentru a evidenția în general compușii organici, este de asemenea utilizat pentru pulverizarea plăcilor cu o soluție concentrată de acid sulfuric care, prin carbonizarea compușilor organici, lasă halouri negre.
Asigurând observarea la lumină ultravioletă, separarea se realizează pe plăci deja impregnate cu o soluție de fluorescenă . În acest fel, orice substanță prezentă va atenua fluorescența și va fi evidențiată de halouri mai întunecate.
Pentru a recunoaște cu certitudine diferitele componente, cantitățile cunoscute de substanțe de referință (numite standarde ) sunt depuse pe placă alături de amestecul care urmează să fie separat.
Pentru efectuarea unei determinări cantitative, se folosește o placă fluorescentă pentru separare, apoi zonele care conțin substanța de analizat sunt identificate și delimitate și absorbantul absorbant este îndepărtat și colectat. Se efectuează apoi dozarea substanței în cauză.
Aceeași procedură se efectuează pe punctele standardelor, cunoscute cantitativ, pentru a avea un termen de comparație pentru dozare. Prin urmare, cu proporții simple din datele de dozare, este posibilă urmărirea cantității prezente în termeni absoluți.
O măsurare semicantitativă aproximativă poate fi efectuată prin compararea intensității halo-ului întunecat (în lumină ultravioletă) sau a culorii dezvoltate (prin reacție cu agenți de dezvoltare) produsă de probă cu cea a unei serii de soluții standard la diferite concentrații.
Similar cu HPLC în ceea ce privește cromatografia pe coloană lichidă, HPTLC reprezintă o implementare de înaltă performanță a cromatografiei în strat subțire.
TLC este o tehnică care se găsește adesea acceptată în industriile chimice specializate în producția de coloranți sau coloranți de diferite tipuri, care permite verificarea compoziției corecte a culorii, identificând în consecință anomalii sau urme de coloranți care nu trebuie să fie prezenți în produsele finite .
Notă
- ^ (RO) IUPAC Gold Book, „cromatografie în strat subțire” , pe goldbook.iupac.org. Adus pe 7 august 2014 .
- ^ (EN) chemistry.mcmaster.ca, http://www.chemistry.mcmaster.ca/adronov/resources/Stains_for_Developing_TLC_Plates.pdf
- ^ myttex.net , http://myttex.net/forum/Thread-Reagenti-spray-per-TLC .
Bibliografie
- GD Christian. Chimie analitică . Piccin. ISBN 88-299-0464-3
- DE Skoog, JJ Leary. Chimie analitică instrumentală . EdiSes. ISBN 88-7959-066-9
Elemente conexe
Alte proiecte
-
Wikimedia Commons conține imagini sau alte fișiere pe cromatografie în strat subțire
| Controlul autorității | Tezaur BNCF 19132 · LCCN (EN) sh85134870 · GND (DE) 4013227-4 |
|---|
