Electroforeza proteinelor din zer

Mai multe urmări electroforetice cu patologii conexe

În chimie și medicină , electroforeza proteinelor este o metodă de analiză a proteinelor prezente în sânge și ser . Este o metodă de separare a particulelor încărcate electric, care are loc prin electroforeză , adică prin trecerea continuă a curentului electric într-o soluție .

Instrumentaţie

Echipamentul necesar pentru a efectua o separare electroforetică constă din:

o cameră umedă pentru ETF: tavă din plastic din aluminiu împărțită de un sept în două compartimente în fiecare dintre care este așezat tamponul. În fiecare compartiment desenează un electrod format dintr-un fir de platină și cei doi electrozi sunt conectați la polii respectivi ai unei surse de alimentare .
a benzilor electroforetice: reprezintă suportul solid și poros pentru migrație. Pot fi de diferite tipuri (amidon, agar, hârtie) în funcție de gradul de rezoluție care trebuie obținut. Gelul de acetat de celuloză este cel mai utilizat suport pentru capacitatea sa multi-fracționată, pentru ieftinimea și durata de valabilitate (în 30% metanol poate fi păstrat pe termen nelimitat).
poduri: acestea sunt suporturi din plastic pe care benzile sunt întinse și fixate în așa fel încât capetele să fie scufundate în tampon, care, crescând prin capilaritate, pot fi distribuite pe întreaga bandă.
un aplicator: are funcția de a depune o cantitate foarte mică de ser sub forma unei benzi drepte subțiri perpendiculare pe banda electroforetică. Mai multe tipuri de aplicatoare, simple sau multiple, sunt disponibile comercial, capabile să depună cantități constante și să permită o bună standardizare a metodei.
o sursă de alimentare: convertește curentul de rețea (alternativ) în curent continuu stabilizat. Oferă o diferență constantă de potențial și permite operatorului să aleagă tensiunea de curent dorită.
un densitometru : spectrofotometru capabil să măsoare transmisia luminii printr-o bandă colorată mai degrabă decât printr-o soluție conținută într-o cuvă. Banda este așezată pe un cărucior special de transport cu alimentare micrometrică, care avansează cu o viteză constantă în fața fototubului, astfel încât spectrofotometrul să poată citi diferitele benzi. Densitometrul oferă procentele diferitelor fracții proteice pe un afișaj digital; dacă este conectat la un recorder, se obține un grafic având valorile absorbantei pe ordonată și poziția benzilor pe abscisă. Densitometrul a fost înlocuit acum de computer, care prin intermediul unui program specific citește banda electroforetică și apoi elaborează graficul.

Acest tip de analiză se efectuează utilizând diferite tipuri de suport, în special cu acetat gelatinizat și gel de agaroză. În ultimul timp, electroforeza pe capilare direct din eprubeta primară este din ce în ce mai utilizată, în avantajul pregătirii probei și al vitezei de analiză.

Metodă

Particulele încărcate migrează către electrodul de sarcină opusă cu o viteză de migrare sau mobilitate electroforetică legată de numeroși factori în funcție de natura mediului și câmpul electric aplicat și mai ales de masă , dimensiune, sarcină și formă a diferitelor particule. În electroforeză proteinele reacționează ca molecule încărcate electric într-o soluție acidă sau alcalină : ele sunt de fapt polimeri ai aminoacizilor și, prin urmare, au grupări carboxilice și amino . În funcție de pH - ul soluției tampon , unde curentul curge, pot fi induse sarcini negative sau pozitive. În special, într-o soluție alcalină, grupa carboxil a moleculei este neutralizată în funcție de reacție:

 -COOH + OH ^- → -COO ^- + H ₂ O

formând ioni negativi care vor lăsa o încărcătură negativă netă în proteină. Cu toate acestea, într-o soluție ușor acidă, grupa amino asociază un proton așa cum se poate observa în reacție:

 -NH ₂ + H ⁺ → -NH ₃ ⁺

formând astfel ioni -NH ₃ ⁺ și lăsând astfel o sarcină clar pozitivă pe moleculă.

Dorind să efectueze o electroforeză serică, se utilizează un tampon de pH alcalin care conferă moleculelor proteice o sarcină negativă, făcându-le solubile fără a le supune denaturării .

Interpretare

Există două clase principale în proteinele din zer : albumina și globulina .

Albumină

De obicei, albumina și globulinele sunt în proporții similare, dar albumina este mult mai scurtă și încărcată negativ, prezentând o concentrație vizuală mai mare. Există, de asemenea, o bandă mică deasupra albuminei numită pre-albumină .

Globulinele

Globulinele sunt clasificate în funcție de benzile relative:

zona alfa (α) sau alfa globulina este împărțită în două benzi:
- alfa ₁ - alfa ₁ -antitripsina , alfa ₁ - glicoproteină acidă , alfa-fetoproteină .
- alfa ₂ - haptoglobină , alfa2-macroglobulină , alfa2-antiplasmină , protrombină , ceruloplasmină , colinesterază .
zona beta (β) sau beta globulină : transferină , lipoproteinăcu densitate mică (LDL), complement C3
zona gamma (γ) sau gamma globulină : imunoglobuline ( IgA , IgD , IgE , IgG și IgM ); paraproteine ; în această zonă apar de obicei benzi monoclonale .

Valorile normale

La femeie

Albumină	55,0 - 68,0%
alfa ₁ -antitripsina	1,5 - 5,0%
alfa-acroglobulină	6,0 - 12,5%
Haptoglobina	0,34 - 2,00%
Transferrin	2,0 - 3,8%
Complement C ₃	0,75 - 1,40%
Imunoglobulina G	6,9 - 14,0%
Imunoglobulina A	0,88 - 4,10%
Imunoglobulină M	0,34 - 2,10%