Villocenteza

Informațiile prezentate nu sunt sfaturi medicale și este posibil să nu fie corecte. Conținutul are doar scop ilustrativ și nu înlocuiește sfatul medicului: citiți avertismentele .

Acest articol sau secțiune despre medicină lipsește sau lipsește de note specifice și referințe bibliografice . Deși există o bibliografie și / sau linkuri externe , nu există o contextualizare a surselor cu note de subsol sau alte referințe precise care indică cu promptitudine originea informațiilor. Puteți îmbunătăți această intrare citând mai precis sursele . Urmați sfaturile de proiectare de referință .

Villocenteza
Procedura de diagnostic Micrografie care prezintă vilozitățile corionice. Colorare H&E.
Clasificare și resurse externe
ICD - 10	16603-00
ICD - 9	75,33
ICD -9-CM	75,33
Plasă	D015193
MedlinePlus	003406

CVS , sau eșantionarea villusului corionic , implică aspirarea unei cantități mici de țesut corionic (10-15 mg ).

Eșantionarea villusului corionic își găsește raportul în considerarea că trofoblastul și fătul provin din același țesut.

Aplicarea tehnicii ADN la diagnosticul prenatal al unei boli monogene a fost practicată pentru prima dată în 1976 și a vizat căutarea mutației genice responsabile de alfa - talasemie .

Această primă experiență a fost urmată de multe altele, atât pe vilozitățile corionice, cât și în lichidul amniotic , până în prezent, în care se poate spune că posibilitatea diagnosticării unei boli genetice în perioada prenatală cu ADN nu recunoaște nicio altă limită decât cea a cunoașterii și marcării genetice a site-ului sau a site-urilor responsabile de boală. Cu alte cuvinte, ori de câte ori biologii moleculari sau geneticienii recunosc gena unei boli la adult, această cercetare poate fi efectuată și la făt .

Abordarea transabdominală a fost sugerată în 1984 și utilizată pe scară largă din a doua jumătate a anilor optzeci cu avantaje indubitabile, comparativ cu eșantionarea transcervicală, atât pentru familiarizarea mai mare a operatorilor cu această abordare, cât și pentru riscul mai mic de infecție intrauterină .

Valabilitatea analizei villusului corionic ca test de diagnostic prenatal a fost demonstrată pentru prima dată în lume de către omul de știință italian Giuseppe Simoni , genetician, cu un studiu publicat în Lancet în 1983 în colaborare cu ginecologul Bruno Brambati ^[1] .

Domeniul de aplicare

Examinarea vilozităților corionice este utilizată pentru evaluarea cariotipului , adică a structurii cromozomiale fetale, pentru a evalua normalitatea acesteia sau, dimpotrivă, prezența anomaliilor.

Se efectuează între a 11-a și a 13-a săptămână de gestație.

Indicațiile pentru eșantionarea vilozităților corionice, deja din cele mai vechi timpuri, au inclus, pe lângă studiul cariotipului și, prin urmare, modificările cromozomiale numerice și structurale, precum și analizele enzimatice și moleculare . Cercetarea, care vizează obținerea cariotipurilor aferente din celulele trofoblastice, este deosebit de atractivă tocmai datorită vitezei cu care poate fi obținut rezultatul citogenetic.

De fapt, celulele trofoblastice au un indice de creștere mitotic ridicat și permit efectuarea culturilor pe termen lung, adesea foarte rapide (doar 5-7 zile), o perioadă mai scurtă decât culturile de amniocite . Mai mult, posibilitatea de a putea examina direct celulele luate în mitoză spontană face ca termenii temporali să fie reduși la doar 2-3 zile.

Testul este oferit pacienților considerați a fi cu risc crescut de anomalii cromozomiale ^[2] , cum ar fi:

• femeile cu vârsta peste 35 de ani
• grosimea crescută a translucenței nucale
• copil anterior cu anomalie cromozomială
• părinți cu alterări cromozomiale ( translocații , inversiuni , aneuploidii )

Este util să menționăm pe scurt de ce diagnosticul molecular al vilozităților corionice înlocuiește din ce în ce mai mult cercetările tradiționale privind lichidul amniotic și sângele fetal.

Subiecții care sunt supuși diagnosticului molecular sunt de obicei motivați de un risc ridicat pentru anomalia specifică, un risc evaluat de obicei de către genetician pe baza parametrilor anamnestici și a familiarității.

Cea care are un risc ridicat și, prin urmare, o mare posibilitate de a trebui să întrerupă sarcina , necesită un diagnostic cât mai devreme posibil, iar CVS răspunde bine la această cerință. De fapt, este cel mai devreme diagnostic prenatal și, în plus, din punct de vedere strict de laborator, a avea o cantitate adecvată de material de relevanță fetală ajută în continuare la scurtarea timpului de diagnostic. Dacă același diagnostic ar fi pus pe lichidul amniotic, ar trebui utilizată o cultură celulară preliminară care ar prelungi considerabil timpul de analiză. De asemenea, este vorba de anumite diagnostice, care lasă puțin loc pentru erori de interpretare dacă sunt bine efectuate și pe materiale pure și de bună calitate.

În prezent, multe boli genetice sunt studiate în mod obișnuit pe vilozitățile corionice și utilizarea tehnicilor tradiționale, cum ar fi funiculocenteza , trebuie eliminată complet. De fapt, cercetările ticăloase sunt mai timpurii, mai sensibile, exacte și mai puțin riscante.

Luați, de exemplu, cercetarea asupra anemiei mediteraneene . Până acum câțiva ani a fost efectuată o funiculocenteză în jurul celei de-a 20-a săptămâni de sarcină, diagnosticul (presupunând că eșantionarea a avut succes) a fost efectuat cu o analiză morfologică și, prin urmare, inexactă. Riscul de a face un avort a fost ridicat și extrem de greu din punct de vedere fizic și moral a fost recurgerea la întreruperea voluntară a sarcinii care, în cazul unui făt afectat, trebuia să aibă loc la sfârșitul lunii a șasea. Astăzi, căutarea mutațiilor genetice asupra vilozităților corionice oferă un diagnostic de certitudine la numai 9-10 săptămâni de gestație, cu un risc foarte redus de avort și cu posibilitatea de a suferi o întrerupere voluntară, pentru fătul afectat, totuși în primul trimestru de sarcină.

În prezent, numeroase patologii au intrat în categoria diagnosticelor prenatale ale tulburărilor mendeliene , prin vilozități corionice. Cele mai frecvente includ surditatea congenitală, sindromul X fragil și fibroza chistică ; printre sutele altor mai rare, remarcăm distrofia musculară Duchenne , hemoglobinopatiile , sindromul Werdnig-Hoffmann .

Cu toate acestea, trebuie avut în vedere faptul că, după cum sa menționat anterior, numărul acestora crește zilnic și este întotdeauna necesar să se mențină contacte strânse cu diferite centre de biologie moleculară și genetică pentru a ști dacă este posibil să se ajungă la diagnosticul unuia dintre acestea. dintre acestea, chiar dacă ar fi vorba de boli rare și puțin cunoscute.

Căutare paternitate

Prin villocenteză este posibil să se identifice cu certitudine absolută părintele biologic. Acest lucru se întâmplă atât în ​​cazurile de litigii legale și / sau patrimoniale, cât și, mai rar, la subiecții supuși fertilizării in vitro unde există suspiciunea unui schimb și / sau a unei erori de implantare a zigotului .

Celulele rezistente

Vilozitățile corionice conțin celule stem fetale multipotente ^{[3] [4] [5]} .

Astăzi este, de asemenea, posibil să se păstreze pentru utilizare autologă celulele stem prezente într-un fragment din vilozitățile corionice luate în timpul execuției CVS ^[6] .

Celulele stem ale villusului corionic sunt celule stem fetale mezenchimale cu perspective de aplicare în medicina regenerativă, având capacități reproductive bune și stabilitate genomică excelentă. Aceste celule își păstrează caracteristicile stem intacte pe tot parcursul sarcinii, atât de mult încât pot fi preluate și dintr-un fragment de placentă extras după naștere ^{[7] [8] [9] [10]} .

Căutați agenți infecțioși pe vilozitățile corionice

Faptul că bolile infecțioase pot provoca malformații fetale este un concept antic. În 1971 a fost inventat termenul complex TORCH , acronim pentru Toxoplasmoza , Rubeola , Citomegalovirus , Herpesvirus , pentru a descrie o serie de infecții care, transmise fătului în perioada prenatală, ar putea provoca o anomalie.

Prin urmare, diagnosticul prenatal sa concentrat imediat pe încercarea de a recunoaște debutul bolii și orice defect într-un stadiu incipient.

Cu toate acestea, este necesar să se informeze clar despre limitele diagnosticului prenatal al bolilor infecțioase; în acest scop, există câteva principii culturale la care merită să ne referim înainte de a interpreta un protocol de diagnostic prenatal pentru o posibilă boală infecțioasă. Acest sistem va constitui, de asemenea, o parte integrantă a consimțământului informat la care părinții trebuie să fie introduși înainte de fiecare procedură operațională:

1. prezența unei infecții la mamă nu înseamnă deloc că aceasta trebuie să treacă în mod necesar la făt, deoarece există bariere naturale de apărare. Fiecare procedură invazivă trebuie să țină cont de acest concept, pentru a evita recurgerea la intervenții inutile și uneori periculoase;
2. diagnosticul prenatal invaziv, oricât de rafinat și sensibil este, ne poate oferi doar informații despre o posibilă infecție fetală. Dacă acest lucru a determinat sau nu o anomalie la făt, nu va fi niciodată capabil să o stabilească cu precizie, ci doar în termeni probabilistici . Prin urmare, ultrasunetele rămân singurul instrument adevărat capabil să diagnosticheze orice leziune teratogenă, numai dacă acesta este unul dintre cele care pot fi diagnosticate cu ultrasunete . Rezultă că este absolut necesar să se precizeze în mod clar că diagnosticul prenatal invaziv vizează numai căutarea agentului infecțios și nu posibila malformație.

Utilizarea CVS pentru a diagnostica infecția compartimentului fetal este o procedură relativ recentă. În esență, datorează introducerea posibilității, oferite de biologia moleculară , de a recunoaște chiar și porțiuni minime din materialul genetic al agentului infectant. De fapt, în vilozitățile corionice agentul infecțios rămâne mult timp, chiar și mult după ce infecția acută este acum epuizată și nu poate fi găsită în alte compartimente. Placenta este de fapt un mediu de cultură excelent în care prezența agentului infecțios poate rămâne chiar și după naștere.

Posibilitatea de a efectua cercetări privind ADN - ul agenților infecțioși, în special de natură virală , a modificat substanțial protocoalele tradiționale, făcând ca utilizarea funiculocentezei să nu mai fie justificabilă la nivel de diagnostic, deoarece este tardivă, imprecisă și riscantă. Acest lucru nu se modifică în cazul infecțiilor cauzate de virușii ARN , deoarece procedura este complicată doar de o etapă enzimatică preliminară, cea a transcriptazei inverse , care vizează schimbarea secvenței ADN.

O importanță enormă este utilizarea tehnicii de laborator a reacției în lanț a polimerazei (PCR), înainte de a căuta agentul infecțios cu secvențele specifice, prin hibridizare sau altă tehnică genetică. De fapt, PCR permite amplificarea celor câteva secvențe de ADN disponibile de peste un milion de ori, accelerând timpii de investigație și făcând cercetarea moleculară mult mai sensibilă.

Izolarea virusului în vilozitățile corionice poate fi înșelătoare în singurul caz în care a colonizat doar partea maternă și nu a străpuns partea fetală a placentei. Cu toate acestea, această apariție este mai mult teoretică decât reală și găsirea de ADN infecțios pe vilozitățile corionice corespunde, în aproape toate cazurile, cu descoperirea sa la nou-născut. Cu toate acestea, această ipoteză trebuie luată în considerare în cazurile îndoielnice în care pozitivitatea este limitată, iar cercetarea asupra altor țesuturi fetale este negativă.

Microarrays

În ultimii ani, au fost introduse microarrays , utilizate pentru a permite examinarea simultană a unui număr mare de produse genetice.

Tehnica utilizată astăzi (CGH, Analiza comparativă a microarray-ului de hibridizare genomică ) permite o identificare mai precisă a anomaliilor genetice fetale decât analiza cariotipului tradițional, fiind mai sensibilă la mici variații genomice care nu au fost găsite altfel, cum ar fi microdelecțiile și microduplicările . În acest fel, o gamă largă de patologii genetice selectate pot fi studiate în același timp, inclusiv cele care implică rearanjarea subtelomerilor (componente microscopice ale ADN-ului ), care au fost recent recunoscute ca fiind o cauză de întârziere mintală ^[11] .

Metoda, utilizată în prezent doar în centre foarte specializate, se numește Micro Deletion Telomeric - CGH Array și odată cu aceasta, în prezent, sunt analizate următoarele gene și deleții cromozomiale:

1. 1p36 sindrom de monozomie
2. Sindromul Van Der Woude
3. Nefronoftiză 1
4. Sindromul brahidactiliei - întârziere mintală
5. Sindromul Wolf-Hirschhorn
6. Sindromul Cri du Chat
7. Polipoză colon adenomatos ereditar
8. Sindromul Sotos
9. Sindromul Saethre-Chotzen
10. Sindromul Williams-Beuren
11. Sindromul Kallmann 2
12. Sindromul Langer-Giedon
13. Sindrom de monozomie 9p
14. Sindromul HDR
15. Sindromul DiGeorge / Sindromul Velocardiofacial
16. Sindromul Wagr
17. Sindromul Potocki-Shaffer
18. Sindromul Prader-Willi / Sindromul Angelman
19. Sindromul ATR-16
20. Lissencefalia Miller-Dieker
21. Boala Charcot-Marie-Tooth
22. Neuropatie. Ereditar, cu paralizie
23. Sindromul Smith-Magenis
24. Neurofibratoză spinală ereditară
25. Sindromul Alagille
26. Sindromul Digeorge
27. Neurofibromatoza de tip 2
28. Mic de statura
29. Deficitul de sulfatază
30. Sindromul Kallmann 1
31. Distrofia musculară Duchenne
32. Sindromul ATR-X
33. Boala Pelizaeus-Merzbacher
34. Sindromul masculin XX
35. Sindromul Greig
36. Regiunea telomerică și subtelomerică
37. Aneuploidie cromozomială

Cu această metodă este posibil să se analizeze doar ștergerile și microdeletele legate de regiunile studiate. Nu este posibil să se determine prezența mutațiilor genetice și a anomaliilor cromozomiale, altele decât cele descrise mai sus, adică deleții, microdelecții, aneuploidii, microdelecții ale regiunilor telomerice și sub-telomerice.

În prezent, acest sistem este propus pacienților cu făt care poartă anomalii genetice ale căror semne se pot atribui unei boli raportate mai sus și când testele anterioare au dat rezultate negative. Proba biologică ( vilozități corionice , lichid amniotic ) este mai întâi cultivată , ADN-ul este extras din celule și se efectuează metoda. În cazul prelevării de sânge fetal, cultura nu este necesară, astfel încât răspunsul este disponibil într-un timp mai scurt (aproximativ 5 zile).

Este posibil, în cazuri excepționale, să se utilizeze IntegraChip , o micro-matrice de ADN de înaltă densitate formată din 3200 de clone reprezentând regiuni specifice ale tuturor cromozomilor umani, acoperind întregul genom uman cu o rezoluție de 0,9 Mb.

Mai degrabă studii recente evaluează, de asemenea, posibilitatea utilizării tehnologiei microarray în analiza moleculară a unei fracțiuni din ADN-ul prezent într-o fracțiune reziduală a lichidului amniotic prelevat, care nu trebuie cultivat și, prin urmare, ar oferi un rezultat suplimentar. mai rapid pe numărul mare de modificări genomice studiate ^[12] .

Procedura de executare

Eșantionarea villusului corionic se efectuează de obicei între zece și treisprezece săptămâni de sarcină. În cazuri particulare, poate fi efectuat și după aceste săptămâni. Trebuie avut în vedere faptul că, dacă procedura este efectuată înainte de a opta săptămână, a fost raportată posibilitatea apariției malformațiilor membrelor.

Înainte de CVS este necesar să fi efectuat examinări preliminare:

• Grupul sanguin AB0 și factorul Rh al ambilor părinți
• Cercetarea hepatitei B și C la mamă
• Test HIV (nu este obligatoriu)
• Dacă mama are factor Rh și tatăl Rh +, trebuie efectuat și un test indirect Coombs . În acest caz, femeii însărcinate i se va administra profilaxie anti-D , după ce a efectuat proba de sânge.

Potrivit unora, este necesar să se practice, în cele 3 zile premergătoare examinării, o terapie cu antibiotice pentru sterilizarea mamei de orice preinfecție cu micoplasmă sau clamidie .

CVS transcervical

Aceasta este cea mai veche tehnică, acum aproape complet abandonată.

CVS transabdominal

CVS transabdominal este acum tehnica preferată pentru multe centre. Propusă în 1984 ca o metodă mai puțin riscantă de diagnostic citogenetic decât transcervical, a fost folosită mai întâi, deși sporadic, în diferite scopuri, cum ar fi diagnosticarea aluniței hidatiforme în 1966 sau evaluarea stării placentare.

Tehnica dezvoltată și aplicată în prezent în centre foarte specializate se bazează pe eșantionare ghidată cu ultrasunete folosind un singur sau „dublu ac”. Se utilizează aceeași sondă cu ultrasunete descrisă pentru amniocenteză și este echipată în unele centre cu un suport reglabil echipat cu un tunel de ghidare al cărui diametru poate fi variat în funcție de diametrul acului.

În tehnica cu două ace, primul ac, numit „ghid”, are un diametru gabarit de 18 și o lungime de 15 cm. În aceasta vom introduce al doilea, numit "sampler", cu un diametru de 20 gabarit și 20 cm lungime, exact la fel ca cel utilizat pentru amniocenteză.

Odată ce a fost localizat punctul exact în care intenționați să luați materialul, se introduce acul de ghidare, se ajunge la marginea frondosului corionului , se scoate mandrina și se introduce al doilea ac care, fiind mai lung decât cel anterior, poate depășiți-l cu atât de mult, încât se va considera necesar să vă adânciți în corion. Acest ac nu va avea deja nicio mandrină și conectat anterior cu o seringă de 20 cc, cu o etanșare bună, care va conține, în unele cazuri, câțiva mililitri dintr-un lichid de cultură sau o soluție fiziologică sterilă. Mișcarea acului de ridicare va fi dublă: excursia în sus și în jos pentru câțiva milimetri, în spațiul corionului dincolo de vârful acului de ghidare și, în același timp, rotația pe axa proprie. Aceste mișcări sunt efectuate în timp ce decompresia maximă posibilă este menținută prin tragerea pistonului . În acest fel, materialul este aspirat, care este tăiat progresiv de ac în mișcările sale; acest material se colectează în seringă. Acul de ridicare se mișcă timp de aproximativ 10 secunde, apoi este scos și seringa a fost schimbată. Această procedură se efectuează de 2 sau 3 ori până când un colaborator, expert în evaluarea materialului, avertizează că acest lucru este suficient. De obicei, o ultimă etapă de aspirație este, de asemenea, efectuată cu acul de ghidare, timp de câteva secunde și fără traumatizare, deoarece, deși întreaga procedură anterioară nu generează în general durere, această ultimă mișcare provoacă una vie. Prin urmare, acest ultim pasaj trebuie să intre exclusiv în acel spațiu trasat de acul de prelevare și să aspire acele vilozități care, deja disecate, rămăseseră încarcerate. Evident, întreaga procedură este urmată direct pe ecranul cu ultrasunete în timp real. În acest fel, este posibil să evidențiați în mod clar poziționarea corectă a acului de ghidare la marginea cea mai proximală a corionului și să verificați excursia corectă a acului de eșantionare.

Trei tipuri de abordare a corionului pot fi realizate cu biopsie transabdominală:

• Corion anterior
• Corion lateral sau fundic
• Corionul posterior

Fiecare dintre aceste eventualități are caracteristici diferite. Corionul anterior este de obicei subțire, ceea ce înseamnă că excursia acului de preluare va fi scurtă. Prin urmare, grosimea maximă trebuie aleasă cu atenție pentru a obține o cantitate mai mare de material. De asemenea, trebuie să evităm perforarea plăcii corionice, care ne-ar duce imediat în sacul gestațional. Pentru a fi precis, având în vedere vârsta gestațională timpurie, această manevră incorectă ar aduce vârful acului în spațiul amnio-corionic.
Corionul lateral sau fundal din orice perete a fost depozitat, permite o excursie largă și materialul colectat este de obicei abundent. Această listare este cea mai bună și cea mai frecventă. Trebuie avut grijă să pătrundă în mijlocul corionului, păstrându-se echidistant între limita miometrială și placa corionică. Dacă intrați în apropierea bazei de inserție, acul de retragere provoacă o detașare a corionului și sângerări vaginale. Acestea sunt de obicei cazurile în care riscul de avort spontan crește.
Prezența unui corion dispus posterior ar necesita ca acul de ghidare să traverseze sacul gestațional pentru a ajunge la el. Această eventualitate, într-adevăr, este destul de rară, întrucât modalitatea de manevrare a sondei și a locului de prelevare este aproape întotdeauna găsită în așa fel încât să ajungă la corion fără a traversa sacul. Cu toate acestea, dacă acest lucru este necesar, se poate face fără o preocupare specială. Experiența actuală a centrelor foarte specializate, acumulată în efectuarea embrioscopiilor de diagnostic, a arătat clar că este întotdeauna foarte dificil ca embrionul să fie lovit cu acul. Mai mult, la 10 săptămâni s-a observat că cea mai mare parte a cavității este ocupată de fluidul dintre amnion și corion, așa-numitul spațiu amnio-corionic. Embrioscopic este clar cum embrionul este întotdeauna colectat dincolo de membrana amniotică subțire și transparentă, care nu este încălcată. După cum sa menționat deja, este aproape întotdeauna posibil să se evite pătrunderea în sacul amniotic și acest lucru se poate face prin modificarea poziției sondei și orientarea adecvată a direcției acului.

Tehnici mixte

În ocazii speciale poate fi necesar să colectăm în același timp vilozități corionice și lichid amniotic . Acest lucru se întâmplă atunci când este necesar să se examineze prezența materialului infecțios în cele două raioane sau când tehnicile genomice necesită o verificare atât pe amniocite, cât și pe celulele trofoblaste. Astfel de investigații se fac de obicei în al doilea trimestru de sarcină. În astfel de cazuri nu este necesar să se efectueze două eșantioane distincte, dar puteți continua într-o singură operație având previziunea de a alege, atunci când poziționați acul, o traiectorie care include placenta și cavitatea amniotică. Există două posibilități pentru această tehnică:

• placenta anterioară
• placenta posterioară.

În tehnicile mixte cu placenta anterioară, acul de ghidare (calibru 18) este introdus până la marginea superioară a cavității corionice, ca în CV-urile comune. Se introduce apoi acul de eșantionare heparinizat (calibru 20), efectuând eșantionarea așa cum s-a descris deja anterior. Acul de preluare poate fi introdus și a doua oară dacă nu există suficient material. În această operație, trebuie să se acorde mare atenție să nu depășească placa corionică pentru a evita provocarea rănirii acesteia cu sângerarea endoamniotică consecventă.
Lichidul amniotic este apoi colectat, introducând un nou ac steril, de același gabarit cu cel de eșantionare, în interiorul acului de ghidare și continuând cu decizia în jos, trecând placa corionică și intrând în cavitatea amniotică. Proba va furniza un lichid care nu este contaminat cu sânge dacă placa corionică a fost respectată în procedura CVS. Odată ce acest ac a fost îndepărtat, o altă frustulă de vilozități poate fi apoi luată, dacă este necesar, prin efectuarea unei alte aspirații cu acul de ghidare. În cele din urmă, pentru tehnici mixte cu placentă anterioară, vor fi utilizate două ace de colectare și un singur ghid.
În tehnicile mixte cu placentă posterioară, metoda este și mai simplă. Acul de ghidare este introdus în cavitatea amniotică fără a ajunge în placentă. Se ia apoi lichidul amniotic, care este mai rapid având în vedere diametrul acului. Acest lucru se face prin pătrunderea acului de ghidare în placentă, perforând placa corionică. În acest moment se introduce acul de eșantionare a vilozităților și de aici înainte ne comportăm ca pentru o eșantionare comună a vilozităților. În tehnicile mixte cu placentă posterioară, se vor utiliza un singur ac de ghidare și un ac de eșantionare.

Controlul materialului preluat

Odată ce culesul a fost efectuat, trecem la faza de verificare a cantității și calității materialului. Aceste operațiuni trebuie efectuate în încăperi adiacente celei de prelevare și, în orice caz, înainte de a scoate gravida din poziția sa, pentru a putea repeta prelevarea la nevoie.
Controlul materialului colectat se efectuează de obicei la microscop , sub o capotă cu flux laminar sau vertical , așa cum sunt cele mai recente. Cu toate acestea, atunci când se obține un grad bun de armonie în echipă, timpii sunt simplificați mult și controlul cantității și chiar al calității materialului preluat devine foarte simplu, care se efectuează deja cu prima observare în seringă.
Separarea vilozităților corionice de decidua bazală și de cheaguri este o procedură la fel de delicată și de obicei încredințată biologului genetician prezent în echipă. În absența geneticianului, după o pregătire adecvată, chiar și un alt colaborator, tehnician, medic sau paramedic îl poate compensa.
După fiecare procedură de aspirație, acul de retragere este îndepărtat, materialul colectat în seringă este examinat rapid. În acest fel, numărul de proceduri pentru introducerea acului de retragere este redus doar la cele necesare.

Materialul colectat este apoi colectat într-o cutie Petri sau într-o eprubetă cu fund conic, cum ar fi Falcon . Cu o pipetă Pasteur, vilozitățile sunt apoi separate și curățate pentru a fi trimise la laborator. Spălarea vilozităților în sine, pentru a le purifica de contaminare (sânge, mucus, deciduă) se efectuează steril cu soluția lichidă sau fiziologică a lui Chang . Aceste proceduri trebuie efectuate sub o capotă cu flux laminar.

Dacă materialul este bine pregătit, vilozitățile vor fi foarte pure, dar, pentru ca geneticianul să poată oferi un răspuns fiabil într-un timp scurt, materialul luat trebuie să fie de bună calitate și nu numai bine pregătit. În primul rând, trebuie avut în vedere faptul că, în scopul unui diagnostic citogenetic mai precis și mai rapid, cel mai bun material vilar este cel găsit în porțiunea cea mai vascularizată a corionului frondos, la introducerea cordonului ombilical . Vilozitățile corionice obținute transcervic derivă din sinusul marginal al corionului frondos care, de obicei, nu sunt cele mai bune pentru un examen citogenetic direct. De fapt, mitoza spontană la periferia corionului este mai rară și, de obicei, cultura trebuie utilizată pentru a obține un răspuns diagnostic. Pe de altă parte, dacă biopsia corionică se efectuează din alte motive decât cele citogenetice, așa cum se întâmplă pentru căutarea anomaliilor genetice prin intermediul analizei ADN, locul eșantionării este indiferent, deoarece nu este necesar să se colecteze vilozități în mitoza spontană. . Pe de altă parte, puritatea materialului are o importanță enormă, astfel încât orice contaminare cu țesuturile materne trebuie evitată.

Cantitatea de vilozități care trebuie luate variază în funcție de calitatea lor și de tipul de investigație care trebuie efectuată. Investigațiile citogenetice sunt cele care necesită cea mai bună calitate a vilozităților. În teorie, cantitatea suficientă pentru o investigație directă variază de la 5 la 20 mg de țesut uscat obținut.
Pentru investigațiile genetice-moleculare, cantitatea de material variază, de asemenea, între 10 și 20 mg, cu o variabilitate considerabilă în funcție de laborator și metodă. Il prelievo per via transcervicale difficilmente può fornire quantità superiori a quelle sovracitate ed è anche per tale motivo che gli operatori si sono rivolti al prelievo transaddominale, in cui è di regola prelevare oltre 50 mg di materiale villare.
Il prelievo di 50 mg è solitamente ben tollerato, senza danni per la prosecuzione della gestazione. Le indagini biochimiche o molecolari sono di solito meno esigenti. Il requisito più importante per tali esami è, come si è detto, la purezza.

Rischi

Come detto in precedenza, la villocentesi risulta gravata da un rischio abortivo variabile in rapporto alla tecnica. Il prelievo transcervicale, con la pinza da biopsia, presenta il più alto rischio abortivo (8%). Con la cannula di Portex il rischio scende al 3,6% in alcuni studi ed al 2,6% in altri. La tecnica transaddominale sembra in molti studi essere gravata da un rischio sovrapponibile a quello trancervicale, entrambe intorno al 2,5%. La tecnica transcervicale risulta oramai abbandonata da troppi anni per potersi raffrontare a quella attuale, transaddominale. Questa è gravata da un rischio abortivo che negli ultimi 3 anni sembra attestarsi attorno all'1,8%. Se andiamo a suddividere la popolazione, ci accorgiamo che esistono poi delle differenze importanti:

• le villocentesi eseguite per via transamniotica (placenta posteriore) hanno un rischio abortivo del 2,9% mentre quelle che non richiedono tale passaggio mostrano un rischio abortivo inferiore all'1%;
• le villocentesi del secondo e terzo trimestre di gravidanza non hanno mai dato esito ad aborto.

La presenza di un sanguinamento nei 2-3 giorni. che seguono la procedura si manifesta in circa 1 caso su 5 e di per sé stessa non pregiudica la gravidanza. Per solito la gestante se ne avvede già subito dopo la villocentesi. L'insorgere di dolori e contrazioni è evenienza frequente, di significato trascurabile ai fini della prognosi giacché presenti in modo del tutto indipendente dall'esito della gravidanza.

Di particolare importanza sono i risultati di uno studio multicentrico compiuto dall' Organizzazione Mondiale della Sanità e presentato all' Euromeeting di Tel-Aviv nel maggio del 1994 . Secondo tale studio, riferentesi ad un'esperienza su 138.996 biopsie coriali, la procedura è piuttosto sicura ed è associata ad un rischio di aborto comparabile a quello delle amniocentesi. Il registro delle biopsie coriali dimostra che la tecnica è correntemente eseguita, essenzialmente, fra la 9º e la 12º settimana di gestazione. La più volte segnalata maggiore incidenza di rischio di anomalie degli arti, non sembra affatto reale. L'incidenza di queste, infatti, dopo biopsia coriale, ha un campo che varia fra il 5,2 e 5,7 ogni 10.000 casi. Considerando che, nella popolazione in generale, lo stesso campo varia fra il 4,8 e il 5,97 su 10.000, la differenza non risulta statisticamente significativa. In definitiva, se tali dati verranno confermati anche in futuro, essi dimostrano che non c'è evidenza di alcun rischio di malformazione congenita dipendente dalla biopsia coriale.
Rimane però il dubbio concreto che essa possa determinare la malconformazione, se eseguita più precocemente. Scarsi sono, infatti, i dati disponibili prima dell'8º settimana. Evitando una villocentesi precoce, in effetti, si escludono dal computo anche quegli aborti naturali che, quando la biopsia coriale è eseguita prima dell'8º settimana, ad essa potrebbero erroneamente essere attribuiti. In centri di diagnosi prenatale ad altissima specializzazione, il rischio abortivo è tra i più bassi della letteratura mondiale essendo stabilmente inferiore all'1% ^[13] .

Risultati

L'esame è molto sicuro, gli errori accadono soltanto in casi eccezionali. In circa un caso ogni 100 esami la coltura delle cellule o la relativa lettura per le malattie cromosomiche viene a mancare. La procedura non è ripetuta solitamente e l' amniocentesi è condotta preferibilmente. Se l'analisi richiesta non è quella del cariotipo (lo studio dei cromosomi), ma è una malattia ereditaria specifica con esame del DNA, la risposta è praticamente infallibile. L'eventualità d'un errore o di una mancanza di una diagnosi è molto improbabile.

La prima risposta diretta per quanto riguarda le malattie cromosomiche la si ottiene dopo solo 48 ore dall'esecuzione del prelievo. La risposta definitiva si ottiene dopo circa 12-15 giorni.

Dopo circa un'ora dal prelievo verrà effettuata un' ecografia per verificare la presenza del battito cardiaco fetale; la paziente potrà poi tornare al proprio domicilio senza alcuna particolare terapia, se non la precauzione di non sollevare pesi e/o effettuare sforzi per 3-4 giorni.

Note

Collegamenti esterni

• ( EN ) Villocentesi , su Enciclopedia Britannica , Encyclopædia Britannica, Inc.

Portale Medicina : accedi alle voci di Wikipedia che trattano di medicina